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钙网蛋白结构、功能与进化 　　摘 要：钙网蛋白（calreticulin，CRT）是一种滞留于内质网的可溶性Ca2+结合蛋白，有N-、P-、C-三个结构功能域，具有分子伴侣和调节Ca2+的稳态等多种生物学功能。近来研究发现，CRT对凋亡细胞的识别和清除发挥重要作用。同源性分析表明CRT的进化高度保守。本文简要概述了CRT的结构、功能及进化的研究进展。 　　关键词：钙网蛋白 生物学功能 细胞凋亡 进化 　　中图分类号：Q9 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2013）06（a）-0226-02 　　钙网蛋白（Calreticulin，CRT）是由oswald和maclennan 1974年第一次分离得到，1989年smith和koch、fliegel等人分别通过分子克隆方法得到CRT的cDNA序列。自此，CRT在很多实验室得到广泛研究。迄今为止，在脊椎动物、无脊椎动物和高等植物中均分离得到CRT的cDNA序列。而在酵母菌和原核生物中目前认为不存在CRT基因。 　　1 CRT的组成和结构 　　CRT是非肌肉细胞内质网中的主要钙结合蛋白，由单基因编码，含有一个氨基末端信号肽序列和一个羧基末端内质网滞留信号序列（KDEL）。这些特殊的氨基酸序列能够确保CRT进入和滞留在内质网中。序列预测表明，CRT有一个或多个非保守的N-连接型糖基化位点，N-末端功能域有三个保守的半胱氨酸残基位点，其中的两个半胱氨酸残基形成二硫键（C120-C146），这对CRT氨基末端区域的正确折叠可能很重要。 　　CRT有三个结构功能域，N-功能域、P-功能域和C-功能域（图1）。CRT的N-末端区域是一个高度折叠的球状结构，包含8个反向平行的β束连接着蛋白形成的环形结构，氨基酸序列非常保守，有4个组氨酸残基，能结合锌离子Zn2+。P-功能域有一个富含脯氨酸的序列，由两个三次重复的氨基酸序列PXXIXDPDAXKPEDWDE和GXWXPPXIXNPXYX 组成，这两个重复序列对CRT凝集素样分子伴侣的功能至关重要。P-功能域对于Ca2+有高的亲和力。C-末端区域是高度酸性的，末端有内质网滞留序列KDEL。在CRT的C-功能域每摩尔CRT可以结合超过25mol Ca2+，Ca2+与C-功能域的结合在控制CRT与PDI、ERp57和可能的其它分子伴侣相互作用方面发挥调控作用。 　　图1中小圆圈代表重复序列A（PxxIxDPDAxKPEDWDE），小方块代表重复序列B（GxWxPPxIxNPxYx），KDEL为内质网滞留信号[1]。 　　2 CRT的生物学功能和细胞凋亡 　　CRT在内质网、细胞核、细胞质和细胞外有广泛的功能。其中，Ca2+的稳态和分子伴侣是CRT在内质网中最重要的两个功能，细胞粘附和基因表达调控似乎是CRT在内质网以外的最重要的功能。CRT还有许多其它的功能，包括整合素调节、类固醇激素受体结合蛋白及自身免疫缺陷疾病等。作为分子伴侣，CRT可促进蛋白正确折叠和装配，招募其他折叠酶增加中间物正确折叠的比率。当内质网腔Ca2+浓度连续地变化时，CRT能够维持Ca2+稳态。CRT可利用它的分子伴侣和凝集素样功能调控Ca2+流动穿过内质网膜[2]。CRT与其他伴侣和未成熟多糖的相互作用依赖于Ca2+的存在。CRT参与调节细胞粘附、整合素依赖的Ca2+信号、类固醇敏感基因表达和T淋巴细胞活化，无论在体内还是体外实验都已被证明。在CRT的研究领域一个主要的争论是关于内质网外CRT依赖的调节功能的机制。CRT参与调节细胞黏附作用可能与调节钙粘连素基因表达、纽带蛋白、改变酪氨酸激酶和蛋白磷酸酶活性有关[3]。 　　近来研究表明，CRT在机体对凋亡细胞的识别和清除中发挥重要作用。细胞经历凋亡会使细胞质膜结构发生改变，在预凋亡的刺激下，CRT会暴露于细胞表面，作为一个免疫原性细胞死亡（ICD）信号，与二硫化物异构酶ERp57共同扮演了“吃我”的信号[4]，诱导吞噬细胞识别和清除凋亡细胞。 　　3 CRT的进化 　　CRT在脊椎动物、无脊椎动物和高等植物中广泛存在，关于CRT分子结构及相关生理和病理作用已有很多的研究，但是关于进化的报道较少。Kales等进化树分析显示，硬骨鱼CRT序列高度聚集在一起，哺乳动物和植物CRT分别独立聚集为一枝。ilerová等报道发现蚯蚓CRT与已知序列的无脊椎动物CRT具有很高的同源性（65%～75%）。 　　我们选取了在进化地位上有代表性的物种的CRT序列，包括人、猴、鼠、鸡、爪蟾、河豚、斑马鱼、文昌鱼、海鞘、海胆和线虫，分析了CRT在无脊椎动物和脊椎动物中的进化情况。CRT基因结构比较显示，从无脊椎动物到原索动物，编码外显子出现了不同程度的合并和拆分现象。线虫有3个编码外显子，2个内含子，海胆有8