陶瓷膜超滤纯化香菇多糖及其相对分子质量测定.docVIP

陶瓷膜超滤纯化香菇多糖及其相对分子质量测定 　　摘 要：采用截留分子量为104 u的陶瓷超滤膜纯化香菇多糖溶液，考察运行时间、跨膜压差（TMP）、稀释倍数和操作温度对膜通量的影响，分析各条件下稳定通量的变化规律。 　　关键词：香菇多糖；陶瓷膜；高效凝胶渗透色谱 　　中图分类号：S646.1+20.1 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2013）11-0115-05 　　香菇（Lentinus edodes）属于担子菌纲侧耳科（Pleurotaceae）真菌，是世界名贵食用兼药用菌之一，它含有多种有效药用成分，尤其是含有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和降血糖等生物活性功能的香菇多糖。据报道，分子量大于400 ku的香菇多糖是使其具有抗肿瘤生理活性的主要成分[1～5]。糖类的提取、分离、纯化技术复杂，需在得到多糖粗提液后，除去其中杂质，然后进行混合糖的分离与纯化，工作量较大，技术过程繁杂，常需要采用多种纯化方法[6]。传统的多糖提取纯化方法实验步骤和使用的化学试剂较多，涉及到的仪器较复杂，精制多糖产品的产率较低，不利于后续大规模的生产，而且对环境也有一定的危害。近年发展起来的超滤技术，常用于对多糖样品的脱盐、分级、浓缩[7]。超滤膜分为有机膜和无机膜，采用有机超滤膜分离得到的多糖成品在纯度、色泽等方面均较好，但由于有机膜自身的缺陷，如不耐高温、不耐酸碱、机械强度不够、不耐有机溶剂、易于堵塞、不易清理等，大分子多糖会对其造成不可逆污染，所以，不适合用于香菇多糖的纯化[8～10]。相较于有机膜，无机陶瓷膜主要有以下优点：热稳定性高，耐化学腐蚀，机械强度大，抗微生物能力强，分离效率高等[11]。因此，本研究选用陶瓷超滤膜对香菇多糖溶液进行纯化处理，探讨影响香菇多糖纯化过程的主要因素，以确定适合工业生产的技术参数。 　　多糖分子量的测定常采用超离心法、渗透压法、粘度法等，但这些方法比较麻烦且误差较大。高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）是20世纪70年代后发展起来的测定多糖纯度及相对分子质量的有效方法，具有快速、分辨率高和重现性好的优点[12]。本实验即采用HPGPC法对陶瓷膜超滤纯化的香菇多糖分子量进行测定。 　　1 材料与方法 　??1.1 实验仪器 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 工艺流程 香菇子实体→粉碎→热水浸提→合并提取液后浓缩→乙醇沉淀→真空干燥→粗提取物→Sevag法脱蛋白→陶瓷膜超滤纯化→真空干燥→精制香菇多糖 　　1.2.2 陶瓷膜超滤浓缩实验方法 陶瓷超滤膜实验设备如图1所示。实验前先检查设备管道连接处是否漏水，确定设备运行正常后，将循环罐中的水放掉，然后把稀释后的香菇溶液逐渐加入到循环罐中，并控制K1、K2阀门调节压力，打开冷凝装置调节温度，测定滤液出口处（图1中7处）流出液的通量。 　　1.2.3 膜通量的计算 　　图1 陶瓷超滤膜实验设备示意图 　　1.2.4 苯酚-硫酸法测定多糖含量 　　1.2.6 紫外光谱测定 以0.1 mol/L氢氧化钠为溶剂，将多糖配制成1 mg/ml的溶液，进行紫外扫描，观察280 nm和260 nm处是否有吸收峰，以确定样品中是否含有蛋白质和核酸。 　　2 结果与分析 　　2.1 陶瓷膜超滤香菇多糖的影响因素分析 　　2.1.1 运行时间对膜通量的影响 在陶瓷膜超滤浓缩香菇多糖的过程中，膜通量随时间延长会有不同程度的降低。在跨膜压差（TMP）为0.08 MPa、操作温度40℃、料液比为1∶4的条件下，膜通量随时间的延长呈下降趋势，在前40 min，膜通量下降较快，40 min后下降缓慢，50 min后趋于平稳，基本稳定在（图4）。 　　图4 膜通量随超滤时间的变化 　　这可解释为在初始阶段，香菇多糖分子在膜表面被大量截留，使得膜表面很快出现浓差极化现象，形成较厚的凝胶层，致使膜通量快速下降[14]，此阶段的通量称为初始通量；随着时间的延长，香菇多糖分子不断沉积在膜面上，同时又不断被错流循环的流体带走，当两个过程达到平衡时，凝胶层的厚度基本保持不变，过滤阻力基本恒定，使膜通量达到一稳定值，即稳定通量。由于循环过滤初期的初始通量衰减很快，而达到稳定后能维持很长时间，因而在设计膜组件所需的膜管数量时，应根据稳定通量进行计算[15，16]。 　　2.1.2 跨膜压差对膜通量的影响 跨膜压差（TMP）是指在泵的作用下，料液在闭路的陶瓷膜系统中按照一定的方向进行循环过滤时，陶瓷膜膜管两侧产生的压力差值。TMP的大小直接影响着陶瓷膜的渗透通量。在温度30℃、料液比1∶4的条件下，考察TMP分别为0.03、0.05、0.08、0.11 MPa时膜通量随时间的变化，结果（图5）显示，加入多糖溶液后的最初20 min内，初始通量下降非常快，40 m