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分子标记在我国辣椒种质资源分类上应用现状及展望 　　摘 要：综述了常见分子标记在我国辣椒种质资源分类上的应用现状，并对技术发展趋势进行评价与展望。 　　关键词：辣椒；种质资源；分子标记 　　辣椒是我国主要蔬菜作物之一，栽培面积仅次于白菜。辣椒杂交优势的开发和推广，使品种遗传资源日渐狭窄，加强对辣椒属种质资源的研究，拓宽辣椒遗传渠道，对促进辣椒遗传改良有重要意义。在种质资源研究领域，以分子标记为基础的研究逐渐占据主导地位。 　　1 分子标记的优越性及主要方法 　　DNA分子标记技术主要是基于由单碱基突变和易位、插入、缺失、倒位或转座等导致的DNA序列变异来研究多态性。其优越性包括：不受环境及基因是否表达的限制；遍及整个基因组，数量极大；对生物体无不良影响；多数表现为共显性，可分辨所有的基因型。 　　自1980年Botstein首次利用RFLP标记作为遗传标记开始，迄今已开发出了一系列的分子标记方法。用于遗传多样性研究的可分为四大类：（1）基于Sourthern杂交的DNA标记，如RFLP等；（2）基于PCR的DNA标记，如SSR等；（3）基于PCR与限制性酶切技术结合的DNA标记，如AFLP等；（4）基于单核苷酸多态性的DNA标记，如SNP等。 　　2 分子标记在辣椒种质资源研究上的应用 　　2.1 RFLP标记的应用及评价 　　RFLP（ restriction fragment length polymorphism） 是 Grodzicker等发明的分子标记技术，其检测和显示通过不同的探针与酶组合来实现。用已克隆的DNA片段作探针与Southern印迹后酶切DNA样品分子杂交，经放射自显影或非同位素显色来揭示供试样品间的多态性。 　　Tanksley（1988 ）、Prince（1993）等构建辣椒分子遗传图谱时，RFLP 标记技术在辣椒中得以应用。在国内，中国农科院蔬菜花卉研究所的张玉玺等曾采用RFLP技术对辣椒种质资源分类展开过研究。 　　RFLP 标记具有数量大、稳定遗传、重复性好、共显性等优点。作为第一代分子标记深受重视并广泛应用。但其操作过程较繁琐，需要对探针进行同位素标记，即使应用非放射性 Southern 杂交技术也较为耗时费力。 　　2.2 RAPD标记的应用及评价 　　RAPD（random amplified polymorphic DNA）是建立在PCR 基础上可对整个未知序列基因组进行多态性检测的分子技术，由 Welsh 等和 Wil-liams 等发明。 　　雷进生从100条随机引物中筛选出19条用于RAPD标记，通过聚类分析把67份辣椒种质材料划分为4类[1]。马艳青等利用RAPD技术，对来自不同生态类型的辣椒种质资源亲缘关系进行研究，聚类结果表明，DNA分子水平上辣椒亲缘关系与传统方法研究结论基本一致[2]。陈学军用23条RAPD引物共扩增出209条带，证实：C.annuum与C.frutescens、C.chinense亲缘关系较近，而与C.pubescens、C.baccatum亲缘关系较远[3]，与细胞学研究结果一致。蒋向辉等运用形态标记与RAPD标记对7份朝天椒种质资源进行遗传多样性分析，两种方法聚类分析结果相似[4]。 　　RAPD标记操作简便，避免了 RFLP 技术繁琐的 Southern 杂交操作以及放射性同位素给人带来的危害；可同时检测多个基因位点，且可检测 RFLP 标记不能检测的重复序列区域。不足之处为：一般表现为显性遗传，所提供的信息量不完整且重复性较差。RAPD标记在早期运用较多，现已逐渐被取代。 　　2.3 SSR标记的应用及评价 　　SSR（Simple Sequence Repeat）最早由Litt 等人在1989年建立。罗玉娣等利用27对SSR引物对33个辣椒材料进行遗传多样性分析，聚类结果显示，辣椒果实类型一致的种质资源基本都聚在一起，即它们之间的亲缘关系较近[5]，这与周晶的研究结果一致。白占兵等人从150对辣椒SSR引物中筛选出多态性较好的引物116对，初步建立了基于SSR分子标记技术的辣椒种子纯度鉴定体系。中国农科院蔬菜花卉研究所辣椒育种课题组Huang等利用生物信息学的方法新开发出辣椒的SSR引物400多对[6]。 　　由于SSR技术可揭示完整遗传信息，呈现共显性遗传、结果稳定可靠、重复性好、简便易行，且数量极为丰富，分布于整个基因组；多态性高，等位位点多，因此信息含量极为丰富；这些优点使其成为理想的分子标记并取代 RFLP 而成为被广泛应用的第二代DNA分子标记。其不足在于引物开发较复杂，引物的设计需要建立、筛选基因组文库和克隆测序等一系列实验，较费时费力。 　　2.4 SRAP标记的应用及评价 　　SRAP