甾体类激素药物的分析课件PPT.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 提问可采用什么方法来提高甾体激素类药物的分光光度活性。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 样品要通过前处理，除去辅料的干扰后才进行鉴别试验。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 铁-柯柏试剂(Iron-Kober reagent)。 硫酸亚铁铵加水溶解后，加硫酸及过氧化氢，再与苯酚混合制成。 铁酚试剂比色法具有以下优点：由于加入少量铁盐，能加速黄色形成的速率和强度；加速黄色转变为红色，也能增强红色的稳定性；酚的加入可以消除反应中产生的荧光并加速红色的形成。 铁酚试剂(Iron-phenol Reagent) Principle: Many steroid hormones have characteristic UV absorption because of double bonds (aromatic ring A) and their conjugation with keto groups on them. With the structure of Δ4-3-keto corticoid hormones, androgens, progestogens and many per oral contraceptives have the maximum absorption at about 240nm.With the structure of benzoic ring , estrogens have the maximum absorption at about 280nm. （四）kober反应及铁一酚试剂比色法 1、Kober反应： 指雌激素与硫酸—乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后，重新加热发生颜色改变，并在515nm附近有最大吸收的反应。（特征反应） 1. 原理 λmax=465 λmax=515 雌激素 Kober反应比色法 △ △ 雌二醇-3-甲醚 λmax=465 λmax=515 Kober反应缺点： （1）条件较难控制，易出双色→黄+红 （2）重现性较差： ① 呈色强度和稳定性受试剂浓度、组成、反应时间和温度的影响。 ② 甾体激素提取物中其他物质及制剂中稳定剂，赋形剂,溶剂对测定有干扰。 铁－酚试剂 [(NH4)2Fe(SO4)2 + H2SO4 + H2O2 + 苯酚] * 铁盐的作用ⅰ．能够加快黄色生成的速度 ⅱ．能促进黄色向红色的转变 ⅲ．能增加红色的稳定性 * 酚的作用 ⅰ．可消除反应产生的荧光 ⅱ．能够促进红色的生成 Iron-phenol Reagent 硫酸亚铁铵 浓硫酸 过氧化氢 * 铁酚试剂的组成 * 浓硫酸和过氧化氢的作用 浓硫酸和过氧化氢将2价铁氧化成3价铁。 2. 特点： 优点 较高的灵敏度 具有一定的选择性 缺点 非化学计量反应 反应应控制条件、 注意平行原则 高效液相色谱法 高效液相色谱法具有样品用量少、灵敏度高、分离效能好、快速等优点，因此被各国药典USP(25), BP(2000)、JP(14)采用。HPLC在本类药物的含量测定中，占到分析方法的48%，居各种分析方法之首。在高效液相色谱法中，以反相分配色谱用于甾体激素的含量测定最为广泛。固定相常用十八烷基硅烷键合硅胶；流动相大都是甲醇和水组成的混合液。为了提高分离效果，有时在流动相中加入醋酸缓冲液或磷酸缓冲液调节流动相的pH值。许多甾体激素都具有 Δ4-3-酮基和苯环，直接采取紫外检测器（240nm或280nm波长附近）检测。 HPLC Advantages: Rapid and efficient separation; Small quantities of sam