GC—MS分析栝楼桂枝汤及其入脑挥发性成分.docVIP

GC—MS分析栝楼桂枝汤及其入脑挥发性成分 　　[摘要] 探讨挥发性成分在复方中的作用， 寻找栝楼桂枝汤治疗脑卒中后肢体痉挛的物质基础。采用水蒸气蒸馏提取栝楼桂枝汤及其组方药材天花粉、桂枝、生姜、白芍、大枣、甘草的挥发油，通过GC-MS对栝楼桂枝汤及其组方药材的挥发性成分进行鉴定及比较，同时分析灌胃给药复方后进入大鼠脑组织的挥发性成分。栝楼桂枝汤的挥发性成分主要依次来自桂枝、生姜、大枣、天花粉；入脑成分则主要来自天花粉的挥发性成分。与组方药材相比，经配伍后的栝楼桂枝汤的挥发性成分变化很大；灌胃给药复方后，入脑成分主要来自天花粉的挥发性成分，提示挥发性成分通过脑组织进而发挥治疗脑病作用，间接改善脑卒中后所引起的肢体痉挛等症状。 　　[关键词] 栝楼桂枝汤；组方药材；挥发性成分；GC-MS；入脑成分 　　[收稿日期] 2013-12-11 　　[基金项目] 福建省科技厅重点项目（2012Y0041）；福建省教育厅项目（JA12176）；福建省大学生创新创业训练计划项目（201310393010） 　　[通信作者] 陈立典，教授，博士生导师，Tel：（0592 E-mail： clidianlab@ 　　[作者简介] 李煌，博士研究生，主要从事中药化学成分及质量控制研究，Tel：（0592 E-mail：Lhfjtcm@163.com 　　复方栝楼桂枝汤来自名医张仲景的《金匮要略》，由天花粉、桂枝、白芍、甘草、生姜、大枣组成，具有解肌调营，养营生津之功效，并经临床剂量增减而成验方。经方主要治疗太阳汗出恶风的柔痉，病机为邪阻筋脉，营卫不利，主要症状以身体强硬不适为主[1]。现代临床用于治疗脑卒中后引起的肢体痉挛等症，疗效确切[2-3]。目前经批准为福建省第二人民医院院内制剂（闽2013S0001）。 　　目前对于栝楼桂枝汤的研究大多限于其中单味药的成分和药理活性研究， 而对于栝楼桂枝汤整方的物质基础研究则少有报道，为探讨挥发性成分在复方中的作用， 寻找栝楼桂枝汤治疗脑卒中后肢体痉挛的物质基础， 本研究采用气相色谱-质谱（GC-MS）联用法对栝楼桂枝汤中挥发性成分进行分析研究， 并在相同条件对各单味药材进行了与复方的分析比较， 为栝楼桂枝汤的物质基础研究奠定基础??? 　　在生物体中，药物必须透过血脑屏障进入脑组织才能发挥对中枢神经系统的作用[4]。这些成分是否能进入体内，特别是能否到达脑组织发挥相应的药效作用也未见报道。为此，本实验将对栝楼桂枝汤挥发油灌胃给药后进入大鼠脑组织中的挥发性成分进行分析，进一步研究和探讨复方改善脑卒中后肢体痉挛的药效物质基础。 　　1 材料 　　1.1 仪器 Agilent GC-6890N/MS-5975N 气相质谱仪（Agilent公司）；98-1-B型电子调温电热套（天津市泰斯特仪器有限公司）；FA2004型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；DLSB-5/20低温冷却液循环泵（郑州长城科工贸有限公司）；挥发油提取器（郑州中天实验仪器有限公司）。 　　1.2 试药 天花粉（福建省福州回春中药饮片厂有限公司，批；白芍（福建省福州回春中药饮片厂有限公司，批；桂枝（福建省福州回春中药饮片厂有限公司，批号121019）；甘草（福建省福州回春中药饮片厂有限公司，批；大枣（福建省福州回春中药饮片厂有限公司，批号120315）；生姜（福建省福州回春中药饮片厂有限公司，批号201301022）；所有样品由福建中医药大学中药鉴定教研室杨成梓副教授鉴定，符合《中国药典》（2010年版）的规定；乙醚（国药集团化学试剂有限公司）、无水硫酸钠（阿拉丁试剂有限公司）等均为分析纯。 　　2 方法 　　2.1 供试品溶液制备 取样品处方中的药材量，采用挥发油提取器提取，加10 倍量水，回流提取6 h后，收集挥发油至5 mL 量瓶中，用乙醚定容至刻度，经无水硫酸钠脱水后避光备用。分别取样品处方中的单味药材（天花粉、桂枝、白芍、生姜、大枣、甘草），采用挥发油提取器提取，加10 倍量水，回流提取6 h后，收集挥发油至5 mL 量瓶中，用乙醚定容至刻度，经无水硫酸钠脱水后避光备用。 　　2.2 GC-MS色谱条件 HP-5MS毛细管色谱柱（250 μm×30.0 m， 0.25 μm）；载气为高纯氦气；流速 1.0 mL·min-1，进样口温度280 ℃，分流比30∶1。程序升温： 初始温度70 ℃，保持 2 min，以 4 ℃·min-1升温速率升至200 ℃，保持 2 min，再以10 ℃·min-1升温速率升至280 ℃，保持 7 min。所得挥发油相对含量采用峰面积归一化法进行定量。 　　EI电离方