造血干细胞冷冻保存技术2013青岛.ppt

76 112 117 122 129 145 162 30 28 31 Mechanism: Minimizing intracellular ice formation Reducing cell shrinkage at a given temperature 32 34 35 33 38 40 Mechanism: Minimizing intracellular ice formation Reducing cell shrinkage at a given temperature 42 43 44 45 46 Latent heat of fusion release during freezing, may warm up and damage the sample. 47 48 50 51 52 54 55 59 66 68 70 72 80 97 74 程控降温程序 4?C等待 降温速率： 1?C/分至样本为-4?C 降温速率： 30?C/分至箱体为-60?C 降温速率： 17?C/分至箱体为-20?C 降温速率： 3?C/分至样本为-10?C 降温速率： 2?C/分至样本为-40?C 降温速率： 10?C/分至样本为-80?C 冷冻曲线 储存 1. 液氮蒸气储存 温度：-100℃～-194℃ 2. 液氮保存：-196℃ 程控降温冷冻保存的优点 提前设定程序,按理想速度进行降温 降温速度由程控机控制,降温过程标准化 程控降温冷冻的缺点 程控设备价格昂贵 液氮消耗多,来源不便 冷冻过程耗时长 非程控降温冷冻保存 造血干细胞不通过程控降温直接冷冻保存于零下温度 概况 -80℃冰箱冷冻保存12-16个月的骨髓，CFU-GM回收率为105%?39%。 含2x108 /kg个有核细胞的骨髓在－80OC保存1星期和4个月时间回输给患者均顺利重建造血功能。 近几年应用增多,可采用-80℃、-70℃、或-50℃冰箱。 速度控制： 控制样品袋的体积形状 降温速度控制在1-3OC，平台期控制在4分钟内 防冻液 细胞内外防冻剂联合使用DMSO＋HES 不同浓度的HES和DMSO对CFU-GM及BFU-E回收率的影响（保存3个月后〕 _________________________________________________________________________________ 冷冻保护剂 细胞数 活率 CFU-GM BFU-E 组成 回收率% % % % _______________________________________________________________________________ 4%HES+ 5%DMSO+4%Alb 82.2 80.4 59.8 (P0.05) 46.6 (P00.01) 6%HES+ 5%DMSO+4%Alb 92.0 88.4 73.8 82.2 8%HES+ 5%DMSO+4%Alb 82.2 83.8 66.2 (P0.1) 45.8 (P0.01) 6%HES+10%DMSO+4%Alb 86.8 88.0 75.8 (P0.1) 52.5 (P0.01) 6%HES+15%DMSO+4%Alb 63.0 77.8 49.4 (P0.01) 43.6 (P0.01) 5%DMSO+4%Alb 65.2 80.2 43.8 (P0.01) 31.0 (P0.01) 10%DMSO+4%Alb 73.6　80.2 56.2 (P0.05) 51.6 (P0.01) 10%+auto-plasma 93.4 78.4 _________________________________________________________________________________ PBSCs在-80℃保存不同时间后造血干/祖细胞回收率 _______________________________________________ 保存时间(月） 1 3 5 12 18 ______________________________________________ 细胞回收率% 95±10 95±6 81±9 80