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人黑素瘤中TrkB表达及其意义 　　【摘要】目的：研究TrkB在人黑素瘤中的表达情况。方法：用免疫组化SP法检测40例人黑素瘤和30例人色素痣组织中TrkB的表达。结果：黑素瘤组织和人色素痣组织中TrkB阳性率分别为77.5%和16.7%，两者间差异有统计学意义（P 　　【关键词】TrkB；人黑色素瘤组织；抗肿瘤机制 　　【中图分类号】R739.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2014）2-0439-01 　　恶性黑素瘤（Malignant Melanoma）是一种高度恶性的肿瘤，多发生于皮肤，具有较强的转移侵袭能力。而一旦发生转移，其治疗效果及预后均不理想。目前对于恶性肿瘤转移的机制尚不明确，但越来越多的研究表明恶性肿瘤转移与肿瘤细胞具有抗失巢凋亡能力有关。失巢凋亡（Anoikis）是一种由于缺乏合适的细胞间或细胞与细胞外基质间粘附信息而介导的凋亡[1]。失巢凋亡抑制是恶性肿瘤细胞在转移时生存于循环系统的先决条件，是转移的起始阶段[2]。酪氨酸激酶受体B（Tyrosine kinase receptor B， TrkB）是细胞增殖、分化、凋亡和转移途径中信号传导的调控因子，是抑制失巢凋亡和诱导转移的蛋白[3-4]。本实验采用免疫组化SP法检测40例人黑素瘤和30例人色素痣组织中TrkB的表达，探讨其在黑色素瘤转移中的作用。 　　材料与方法 　　一 材料和方法 　　1.1组织标本：收集2010年至2013年柳州市工人医院以及其它医院未行放化疗黑色素瘤病人行肿瘤切除术后组织标本40例（A组），收集柳州市工人医院2012年至2013年间色素痣经切除后的组织标本30例（B组）。 　　1.2主要试剂：TrkB鼠抗人单克隆抗体购自美国RD公司；生物素标记山羊抗小鼠IgG、免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司；二甲苯、乙醇、氯化钠等为国产分析纯；苏木素购自上海信然生物科技有限公司；中性树胶封片剂购自上海瑞齐生物科技有限公司。采用SP免疫组化法，按试剂盒说明书进行操作。以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。 　　1.3 实验方法：全部标本经石蜡包埋，以4μm厚度连续切片，按照试剂盒说明将切片脱蜡、水化后采用SP免疫组化法，按试剂盒说明书进行操作。取已知切片作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。 　　1.4 结果判定：TrkB主要表达于细胞膜和细胞浆内，阳性物质为棕黄色。在高倍镜下任选择5个视野，参照Salvesen 等的标准，综合染色强度以及阳性细胞所占比例进行半定量分析。染色强度的评分标准如下：不着色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分。阳性细胞所占比例评分标准如下：阳性细胞[5]。 　　随着实验研究的不断深入，在胃癌，肠癌，肺癌，卵巢癌等恶性肿瘤的细胞体外培养研究中均发现[6]TrkB高表达，并具有较强的抗失巢凋亡能力。TrkB/BDNF信号通路的激活与神经母细胞瘤的转移扩散、化疗药抵抗及预后差有关，并影响神经系统的生长发育、神经元群的成形以及神经系统功能的维持。在“失巢凋亡”的调控过程中，许多蛋白激酶信号分子都是以细胞基质的黏附作用为媒介，最终成为失巢凋亡的重要调节因子。研究者对激酶信号介导失巢凋亡的研究大部分集中在 PI3K/Akt和Raf/MEK/ERK激酶信号途径[7]，特别是PI3K/AKT信号途径的激活能增强癌症细胞的生存和抵抗细胞凋亡的能力。TrkB基因也是一种癌基因 ，主要通过激活PI3K/Akt信号通路诱导癌细胞生长和增殖 ，并促进肿瘤细胞的转移和浸润。 　　在本实验中，我们发现在人黑素瘤组织切片中，TrkB的阳性表达率为77.5%，与其在色素痣中阳性表达率（16.7%）有明显差异，其差异有统计学意义。这与研究者在鼻咽癌（阳性率82.5%）[8]胆管癌（阳性率69%）[9]以及卵巢上皮癌（阳性率为67.12%）[10]中的研究结果一致。由于TrkB被证实为失巢凋亡抑制因子，在本实验中证实黑素瘤中存在TrkB的高表达，因此我们推测黑素瘤可能具有抗失巢凋亡能力并通过这种能力引起其转移。 　　虽然TrkB作为一种抗失巢凋亡因子，被认为可能通过PI3K/Akt和Raf/MEK/ERK的信号级联反应引起肿瘤细胞的转移，但其是否同时存在其它作用途径以及在特定肿瘤中的具体作用机制如何均有待于进一步研究。 　　参考文献 　　[1]章应惠，屈伸.失巢凋亡[J].医学分子生物学杂志，2005，2：1-4. 　　[2]Naora H， Montell DJ. Ovarian cancer metastasis： integrating insights from disparate model organisms[J]. Nat Rev C