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在环境工程微生物领域中分子生物技术应用 　　摘要：通过对分子生物技术进行研究，分析了分子生物技术的实施手段和实验方法，并研究了分子生物技术在相关的不同领域中的应用，以促进环境工程微生物领域的快速发展，为环境工程微生物领域的发展提供技术和智力上的支持。 　　关键词：环境工程；微生物领域；分子生物技术 　　中图分类号：Q938文献标识码：A文章编号2013 　　1引言 　　微生物学、环境保护学、环境工程、环境监测等这些互相关联的学科相互作用相互渗透，逐渐形成了一门新的学科体系，即环境工程微生物学科，这一学科是微生物领域中的重要的组成部分。在这一新兴的学科中涉及很多新的需要研究的问题，分子生物技术作为一项新的技术被引进到这一新兴的学科中来，并在环境的净化和监测上发挥着无比重要的作用，但是如今应用得还不是很广泛，技术能力也有待提高，所以在分子生物技术的应用和发展上，一些必要的投入和技术的借鉴成为发展的途径。 　　2分子生物技术 　　2.1PCR核酸技术 　　PCR核酸技术作为分子生物技术的重要的一环，主要包括三个不同方面的技术范围。 　　2.1.1PCR-SSCP技术 　　这一技术主要是利用银染法和荧光的检测技术进行分析SSCP凝胶DNA谱带，并在很大程度上简化了测试的试验步骤。进行测验一般分为这样几步：首先要进行环境样品的取样，并在样品中抽取DNA组别；第二步就是利用PCR扩增技术，把第一步获取的基因组进行扩增；第三步将进行相应扩增后的基因组进行变性工作，制作成单链的DNA结构；第四步把得到的单链的片段放到相应的电泳凝胶中，进行电泳并得到分离出来的不同谱带；第五步进行割带回收DNA，并进行不同DNA谱带的碱基序列的测定工作，并同基因文库进行比较，确定所测微生物的种类。这五步就大体完成了PCR-SSCP技术，这项技术在微生物的种类测定上已经得到应用。 　　2.1.2PCR-DGGE技术 　　根据生命物理学的知识，生命物质碱基的顺序有差别，运用这个技术进行电泳的实验，在这个实验中主要目的是依据不同的变性剂解链得到不同的目标物质。结合这一原理，首先从环境样品中提取样本基??组DNA；第二步利用PCR扩增技术原理扩增目标基因组；第三步将扩增后的基因组加入到有变性剂聚丙烯酰胺凝胶中，目标基因组双链DNA电泳后形成不同的单链DNA谱带；第四步即割带回收，进行碱基序列的测定并对比基因文库，确定微生物的种属。 　　2.1.3PCR-RFLP技术 　　这项技术不同于以上两种，主要是利用限制性核酸内切酶，在特异的位点上结合一段DNA的识别序列，切割DNA双链。具体的操作方法是在一种被当做引物的物质上添加一项标记，这项标记能够在实验中作相应的对比。在进行切割实验的过程中，采用相应的限制性核酸内切酶得到不同的相应的片段，然后进行电泳得到不同的分布，根据这些标记的位置不同呈现出微生物群落的不同结构和多样性。通过这种方法对微生物环境有进一步的认识。 　　2.2PCR的测序技术 　　在微生物环境中利用分子生物技术分离出一些新的群体或者是不同的种类的生命特征，就有必要进行类别和种类的确定，或者研发一种新型的生物群体的出现。这是需要一定的技术进行支持，PCR测序技术在此刻就派上了用场，使用转DNA进行测序，依据转DNA的相对稳定性和在所有的生物序列中的同源性，进行微生物环境中的微生物的进化和突变上的研究。 　　2.3基因探针测试技术 　　基因探针是指具有特异性的单链DNA片段，首先在微生物环境中寻找微生物样品，然后进行以上的解链步骤，再根据碱基的互补原理与得到的样品进行相应的交互反应。基因探针上需要标记一定的标记物，以便在进行杂交以后能够进行对比观察。在生物技术的发展过程中，基因探针的应用极为广泛，根据化学物质放射性同位素标记的辅助，完成一系列的测序工作，对微生物环境工程中的生物的分离和污染的针对性治理具有重要的作用。 　　3分子生物技术的应用 　　3.1分析微生物的多样性 　　在自然界的环境中存在着大量的生物种类，由大到小多得不可计数，平时我们大多注意到的是那些可以用肉眼看得到的生物，体积上庞大的，体积上中等的，还有用肉眼看都觉渺小的。当然千奇百怪的生命在自然界广泛存在，肉眼所不能及的生物也充斥在我们周围。我们熟悉的泥土、生物膜、河流的底泥、污水、废气等等都蕴含着大量的微生物。如今随着工业的发展，环境污染逐渐严重，环境问题也随之成为大家普遍关注的话题，要了解环境首先要从环境的生物群上进行研究，要想治理环境就要从环境工程的微生物群种中进行研究，因为微生物在环境中起着非常重要的作用。 　　很多的专家学者致力于环境工程微生物的研究，并取得了一定的成果：如明镇寰等曾利用MPN2PCR法对微