中国药品检验标准操作规范2010年版31薄层色谱法(二部).docVIP

薄层色谱法（二部） 1 简述?H2O在140℃加热4h），混匀后加水适量，或用0.2%~0.5%羧甲基纤维素钠水溶液（取羧甲基纤维素钠适量，加入一定的水后，放置使溶胀，加热煮沸至完全溶解，放置，取上清液，即得）适量，在研钵中沿同一方向研磨混合调成糊状，去除表面的气泡后，同3.1.1.1，均匀涂布于玻璃板上。晾干，活化后，备用。 薄层板使用前应检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视），表面应均匀、平整、光滑，无麻点，无气泡，无破损及污染。 3.1.2 市售薄层板 临用前一般应在110℃活化30min。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的层板底边的硅胶层不得有破损，如在储放期间被空气中杂质污染，使用前可用适宜的溶剂在展开容器中上行展开预洗，110℃活化后，置干燥器中备用。 3.2 点样 除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，应能使点样位置正确、集中。点样基线距底边2.0cm（高效薄层板一般为0.8~1.0cm），样点直径为2~4mm（高效薄层板为1~2mm），点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为1.0~2.0cm（高效薄层板可不小于5mm）。点样时必须注意勿损伤薄层板表面。 3.3 展开 展开缸如需预先用展开剂饱和可避免边缘效应。如需预饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，必要时在壁上贴两条与缸一样高的宽滤纸条，一端浸人展开剂中，密封顶盖，一般保持15~30min，使系统平衡或按品种规定操作。 将点好供试品的薄层板迅速放人展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5~1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封顶盖，待展开至适宜的距离（如20cm长的薄层板，展距一般为10~15cm，高效薄层板展距一般为5cm左右），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。 展开可以向一个方向进行，即单向展开；也可以进行双向展开，即先向一个方向展开，取出，待展开剂完全挥发后，将薄层板转动90°，再用原展开剂或另一种展开剂进行展开；亦可多次展开。 3.4 显色与检视 荧光薄层板可用荧光淬灭法；普通薄层板，有色物质可在日光下直接检视；无色物质可用物理或化学方法检视。物理方法是检出斑点的荧光颜色及强度；化学方法一般用化学试剂显色后，立即覆盖同样大小的玻璃板，检视。 4 系统适用性试验 按各品种项下要求对检测方法进行系统适用性试验，检测灵敏度、比移值（Rf）和分离效能，应符合规定。 4.1 检测灵敏度 系指杂质检查时，供试品溶液中被测物质能被检出的最低量。一般采用对照溶液稀释若干倍的溶液与供试品溶液和对照溶液在规定的色谱条件下，在同一块薄层板上点样、展开、检视，前者应显示清晰的斑点。 4.2 比移值（Rf）系指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂前沿的距离的比值。按下式计算 （Rf）= 鉴别时，可用供试品溶液主斑点与对照品溶液主斑点的比移值进行比较，或用比移值来说明主斑点或杂质斑点的位置。 除另有规定外，比移值（Rf）应在0.2~0.8之间。 4.3 分离效能 鉴别时，将对照品与结构相似的药物对照品制成混合对照溶液，按规定方法展开后，应显示两个清晰分离的斑点。杂质检查时，考察分离效能：可将杂质对照品用自身稀释对照品溶液溶解制成混合对照溶液；也可将杂质对照品用待测组分的对照品溶液溶解制成很合对照溶液；或者采用供试品以适当的降解方法获得的溶液。上述溶液点样展开后的色谱图中，应显示清晰分离的斑点。 5 测定法 5.1 鉴别 可采用与同浓度的对照品溶液，在同一块薄层板上点样、展开与检视，供试品溶液所显主斑点的位置（或荧光）与位置（Rf）应与对照品溶液的主斑点一致，而且主斑点的大小与颜色的深浅也应大致相同。或采用供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显示单一、紧密的斑点；或选用与供试品化学结构相似的药物对照品与供试液的主斑点比较，两者Rf值应不同；或将上述两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。 5.2 杂质检查 可采用杂质对照品法、供试品溶液的自身稀释对照法或杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用。供试品溶液除主斑点外的其他斑点应与相应的对照品溶液或系列对照品溶液的主斑点比较，或与供试品溶液的自身稀释对照溶液或系列自身稀释对照溶液的主斑点比较，不得更深。 通常应规定杂质的斑点数和单一杂质量，当采用系列自身稀释对照溶液时，也可规定估计的杂质总量。 6 注意事项 6.1 薄层板的活化与保存 自制薄层板和市售薄层板在使用前均应进行活化，活化后的薄层板应立即置于有干燥剂的干燥器中保存，保存时间不宜过长，最好随用随制，放入干燥箱中保存仅作为使用前的一种过渡。 6.2 供试液的制备 溶剂选择是否适当影响点样原点及分离后斑点的形状，一般应选择