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四、反胶团萃取技术 1 反胶团的特点 2 反胶团的萃取原理 3 反胶团的萃取过程和影响因素 4 反胶团萃取技术的应用 5 反胶团萃取蛋白质设备 1 反胶团的特点 1.1 概述 (1) 反胶团（Reversed Micelles） 表面活性剂：分子亲水的极性头和疏水的非极性尾两部分组成的。 临界胶束浓度(CMC)：当表面活性剂在溶剂中的CMC浓度超 过时,表面活性剂就聚集,形成胶团。 正胶团：在水溶液中形成的胶团; 反胶团：在有机溶剂中形成极性头向内,非极性尾朝外的含 有水分子内核的聚集体。 反胶团是透明的、热稳定的体系。形状通常是球形的。其尺寸可由理论模型导出,但多由实验手段测出。 (2) 微小界面和微小水相 反胶团的极性核有溶解水和大分子(如蛋白质) 的能力。极性核溶入水后形成“水池”(water pool),当反胶团相与含有蛋白质的水相混和,蛋白质能增溶于反胶团的“水池”中, 由于水和表面活性剂在蛋白质分子表面形成一层“水壳” (bulk-like)，使蛋白质不与有机相接触而得到有效保护。 分子识别、选择性透过的半透膜功能。在疏水环境中使亲水性大分子保持活性。 (3) 反胶团对水的溶解能力ω0 反胶团对水的溶解能力，以反胶团增溶的水摩尔数与表面活性剂摩尔数之比表示，即 ω0 =C(H2O) / C(Sur. ) ω0是反胶团的一重要参数。 反胶团物理性质主要取决于反胶团的ω0，ω0值与表面活性剂的种类、助表面活性剂、水相中盐的种类和浓度有关。 1.2 反胶团的形成 (1) 构造 阴离子型、阳离子型和非离子型表面活性剂都可在非极性溶剂中形成反胶团。常用的表面活性剂有两类： 阳离子表面活性剂 以三锌基甲基氯化铵为代表。季铵盐形成的反胶团的含水量较低，通常ω0 ? 3。 阴离子表面活性剂： 以Aerosol OT(丁二酸-2-乙基己基酯磺酸钠, 简称AOT)和琥珀酸2-乙基己基酯磺酸钠(Sodium di-2-ethylhexylsulfosuccinate)为代表。 易得 分子极性头小，有双链，形成反胶团时不必加入助表面活性剂 形成的反胶团大，有利于蛋白质分子的进入。 ω0 值可达50~60。 (2) 反胶团的制备 注入法： 将蛋白质水溶液直接注入到含有表面活性剂的有机溶剂中，搅拌，形成透明的溶液。这种方法易控制水的含量和水核的尺寸。 溶解法： 将含反胶团的有机相与蛋白质固体粉末一起搅拌（非水溶性蛋白质）来使蛋白质进入反胶团。这种方法适用于水不溶性蛋白质。 相转移法： 一般把含有表面活性剂的有机相与含有蛋白质的水相接触,通过搅拌,蛋白质会缓慢地从水相转移到有机相中。这种方法形成的最终体系是稳定的,且可能在低ω0下得到高蛋白浓度。 1.3 应用 生物膜的简化模型 酶类性质基础性研究 疏水性反应场 酶和微生物的一种新型的固定化方法 微小型生物反应器 生物活性物质分离 1.4 优点 很高的萃取率和选择性 分离浓缩可同时进行 解决蛋白质、胞内酶在非细胞环境中迅速失活问题 破壁功能，直接从完整细胞提取酶蛋白，成本低 2 反胶团的萃取原理 蛋白质进入反胶团溶液是一协同过程。在有机溶剂相和水相两宏观相界面间的表面活性剂层，同邻近的蛋白质分子发生静电吸引而变形，接着两界面形成含有蛋白质的反胶团，然后扩散到有机相中，从而实现了蛋白质的萃取。 改变水相条件(如pH 值、离子种类或离子强度)，又可使蛋白质从有机相中返回到水相中，实现不同性质蛋白质间的分离或浓缩。 3 反胶团的萃取过程的影响因素 3.1 表面活性剂 3.2 水相的pH值 3.3 助表面活性剂 3.4 离子强度 3.5 溶剂体系的影响 3.6 温度 3.1表面活性剂 表面活性剂选择 形成反胶团体积较大, 以利于萃取分子量大的蛋白质； 反胶团与蛋白质间的相互作用不应太强, 以减少蛋白质的失活。 阴离子表面活性剂AOT与异辛烷形成的反胶团体系不需加入助表面活性剂, 但对于分子量大于30 000的蛋白质萃取效率较差, 且酶在反胶团中的稳定性也不高。 阳离子表面活性剂如季铵盐形成的反胶团通常体积较小且需要加入助表面活性剂。 据文献报导, 含有聚氧乙烯链的非离子表面活性剂可形成体积较大的反胶团, 酶在其中的稳定性也大为改善, 但需要加入助表面活性剂。 最近一些研究者开始尝试用两种或两种以上的混合表面活性剂形成的反胶团来萃取分子量大的蛋白质。 3.2 水相的pH值 控制水相的pH值是实现蛋白质的萃取/反萃循环的重要方法之一。pH值对蛋白质萃取过程的影响主要体现在改变蛋白质的表面电荷上。 应注意的是, pH值的改变不应过