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EGCG抑制肺癌细胞增殖及其机制的研究 作者：孙辑凯 黄立军 常东胜 　　【Abstract】 AIM: To explore the effect of epigallocatechin3gallate ( EGCG) on the proliferation of lung cancer cells and its mechanism. METHODS: Human lung cancer cell line A549 was cultured with and without EGCG and its suppressed curve was drawn. Apoptosis of the cells was analyzed by Hoechst staining. The expressions of survivin mRNA and protein were investigated by RTPCR and Western Blot. RESULTS: EGCG inhibited the proliferation of the lung cancer cell A549 and cell apoptotic rate was increased to 18% when A549 was cultured with 60 mg/L EGCG (Plt;0.01). The expression of survivin was inhibited significantly in A549 cells treated with 60 mg/L EGCG. CONCLUSION: EGCG can inhibit the growth of human lung cancer cells and induce cell apoptosis. Its mechanism may be associated with blocking survivin expression. 　　【Keywords】 epigallocatechin3gallate(EGCG); lung neoplasms; survivin; apoptosis 　　【摘要】 目的： 研究表没食子儿茶素3没食子酸酯(EGCG) 对人肺癌细胞增殖的影响及机制. 方法： 培养肺癌细胞A549，加入EGCG制作细胞抑制曲线； EGCG作用于人肺癌A549细胞株前后通过Hoechst染色检测细胞凋亡. RTPCR 及Western Blot印迹法研究survivin的mRNA 及蛋白表达的变化. 结果： EGCG可明显抑制A549细胞的增殖, 60 mg/L EGCG作用后,细胞出现明显的凋亡. 同时肺癌细胞中survivin mRNA 和蛋白表达减少. 结论： EGCG可抑制肺癌细胞的增殖,这可能与survivin表达降低有关. 　　【关键词】 表没食子儿茶素3没食子酸酯；肺肿瘤；survivin；细胞凋亡 　　0引言 　　 　　肿瘤的发生是多种因素综合作用的结果. 抗肿瘤机制主要有直接细胞毒作用、诱导癌细胞凋亡或分化、抗突变、抗肿瘤转移、抗肿瘤多药耐药等作用［1］. 表没食子儿茶素3没食子酸(EGCG)是茶多酚中最主要的成分［2］，其对于肺癌细胞的影响报道较少. 本研究发现表没食子儿茶素3没食子酸酯(epigallocatechin3 gallste, EGCG)对肺癌细胞有明显的诱导凋亡作用，而抑制凋亡抑制基因survivin的表达可能是其潜在机制之一. 　　1材料和方法 　　1.1材料表没食子儿茶素3没食子酸(EGCG) 购自Sigma 公司. 人肺癌细胞系A549为本室保存. 采用DMEM 培养基(含100 mL/L小牛血清, 10万U/L 青霉素, 10万U/L链霉素) ,在37℃ 50 mL/L CO2培养箱内进行培养. EGCG以无血清DMEM培养基稀释冻存于-20℃. 　　1.2方法 　　1.2.1细胞毒试验(MTT法)将常规培养的A549细胞用胰蛋白酶消化后制成1×105/L的单细胞悬液，加入96孔细胞培养板中每孔0.2 mL，培养24 h后，换含不同浓度的EGCG培养液，每浓度设6复孔，培养48 h. 实验终止前4 h每孔加入MTT 液(5 g/L) 20 μL ，继续培养4 h . 小心吸去上清液后每孔加入DMSO 150 μL，在振荡器上轻轻振荡5 min 后，酶标仪测定各孔的吸光度值(A490 nm) ,按下式计算各用药组的生长抑制率IR(%):生长抑制率IR(%) = (1 -用药组平均A490 nm/对照组A490 nm)×100 %. 　　1.2.2Hoec