山羊类胚胎干细胞和pgcs的培养与鉴定-动物发育生物学与生物技术专业论文.docxVIP

离到牛、猪、兔的 PGCS(206] ; 1992 年 Matsll 等和 Resnick 等几乎同时用小鼠 pGCs 建立 了干细胞系从哺乳动物的 PGCs 分离多能干细胞，其结果表明来自小鼠 PGCs 的干细胞 集落细胞排列密集 呈鸟巢状、碱性磷酸酶染色、 SSEA-1 呈 阳性，传 20 代以上核型仍 保持正常或接近正常、体外悬浮培养可以形成简单胚体和 l囊状胚体 ;1994 年 Stewart 利用 PGCs 建立了干细胞系并得到生殖系嵌合小鼠阳 ];Cher町等将 29-35d 胎儿生殖峭 分离而来的 PGCs 培养于同龄牛胚胎成纤维细胞饲养层上获得来自 PGCs 的牛胚胎干细 胞;Shim 从 24d 和 25d 猪胚生殖峭及背肠系膜 PGCs 获得司连续传代的胚胎 干细胞【.201]; Shamb 1ott (31]等用机械方法 力11腆蛋白酶离散 35-63d 人胎儿生殖峭和肠系膜，将分离到 的 PGCs 培养于 STO 饲养层表面 ，获得了人胚胎干细胞集落 。1.2 胚胎干细胞的研究进展1. 2. 1 鼠胚胎平细胞鼠 ES 细胞表达 SSEA- l，但不表达 SSEA-3、SSEA-4、11认 -1-60 或1RA- -81o Stevens (1958) 最早发现了l崎胎瘤干 细胞 ，井将小鼠的早期胚胎移植到宰丸或肾脏的被膜下 ， 首先获得了畸胎瘤干细胞(.飞 1974Brinster 获得了畸胎瘤 干细胞iJX合体(.的; 1980 年 Jeon 和 Brinster 就分别对小鼠 PGCs 的形态结构和能量代谢进行了研究 ;1981 年英国 剑桥大学 Evans 和 Kallflllan 首次从小鼠挺胚分离得到小鼠 ESCS(.9]; 1985 年 Doetschman 将小鼠胚胎干细胞分化成 心肌细胞、神经细胞 、红细胞、黑色素等细胞 ; 1988 年 Doetschman 建立了仓鼠类 ES 细胞系。随着基因敲除和基因敲入技术的发展研究人员 将基因突变后的 ESCs 移植到小鼠体内，以研究发育相关基因如关于原癌基因、同源基 因、某些生长因子和l转录因子等的作用臼3-28] 。小鼠 ESCs 可以用于早期胚胎发育的基因和信号通路的研究 。1988 年，研究人员 发现 LIF 在 ESCs 体外培养中具有抑制细胞分化和促进细胞增殖的作用;1999 年许新 等建立了四种品系小鼠 EG 细胞系，发现 EG 对品系的依赖性 差异不显著协];1ojo 等用 同样方法从杂交小鼠 (C57BL/6 X DBA/2) 8 细胞脏也得到了 ES 细胞。小鼠ES 细胞具有 无限增殖的自我更新能力。 SlIda Y 等将小鼠 ES 细胞传 250 代以上没有出现转化的迹 象，它们仍具有正常的 二倍体核型，在生殖系嵌合体中能产生正常的配子，作为核供 体能重组克隆胚胎，上述结果表明 小鼠 ES 细胞是永生性的 。Iannaccone P M 等从大 战 PVG 近交系分离克隆大鼠臼细胞系 RESC-O l，该细胞系对 SSEA-1和 AKP 呈阳性， 在大鼠胎儿成纤维细胞饲养 层上 能很好的增植，在体内环境能分化形成多种细胞类型， RESC-01 细胞系在体外悬浮培养时形成的胚体出现 有节律的收缩运动 ，将其注入囊胚并移植假孕母鼠能生成嵌合体 (30] ; Kawase 等也利用大鼠胎儿 成纤维细胞做饲养层 ，从DA 大鼠品系分离建立 了 RES-DAIES 细胞系，它与小鼠 ES 细胞形态相似， 表达 AKP 罪[1 4C9 抗原 ;Brenin 等也用不同的方法分离得到了 ES 细胞; SlIn 等以大鼠 ES 细胞为核 供休，得到了核移植后代; Vassilieva 等发现大鼠 ES 细胞表达 SSEA -l、Oct-4 和 IL-6 等细胞标记 。129 及其杂交品系小鼠的胚胎 干细胞建系成功率较高，其余品系的小鼠 ES 细胞建 系率很低 ，孟国良发现 :在相同条件下，用 129/ t町、比 C56BL、BALB/ c 品系小鼠胚胎 建立 ES 细胞系的建系成功率更高 (311; 2003 年， M tSlli等人在小鼠罪1]人的 ESCs 中发现 的一类新的内源性同源异型蛋白，命名为 Nanog，它是一个 ESCs 多能性的维持因子， 并发现 Nanog 在维持 ESCs 自我更新时可以不依赖 LIF/ Stat3 路径[叫;2008 年英国剑 桥的 BlIelll了， M.报道他们已经分离到可以生殖嵌合的大鼠胚胎干细胞[叫 ;2008 年中国科 学家利用成年大鼠 体细胞诱 导井构建了大鼠的 iPS 细胞系俐。目前小鼠胚胎干细胞可 以在体外定向