伤寒沙门菌质粒对巨噬细胞自噬通量的影响和作用时相的分析-微生物学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE VI 伤寒沙门菌质粒对巨噬细胞自噬通量的影响和作用时相的研究 中文提要 染组胞内细菌增多；饥饿诱导下，巨噬细胞内出现不均匀的空泡，胞内细菌量低于未 诱导组。 （2）CLSM 检测结果显示，感染后 1 h，χ3337 感染组细胞内黄色荧光聚集结构 （自噬体）多于 χ3306 和 χ3337/pRST98 感染组，CQ 干预后黄色荧光差异更加显著； 红色荧光聚集结构（自噬溶酶体）则未见明显差异；饥饿诱导后，χ3337 感染组平均 每个细胞中自噬体显著多于 χ3306 和 χ3337/pRST98 感染组（p0.01），自噬溶酶体各感 染组差别无统计学意义。 （3）WB 检测结果显示，感染后 1 h，χ3337 感染组细胞 LC3-II 表达量高于 χ3306 和 χ3337/pRST98 感染组，而 p62 表达量则低于后两组；CQ 干预后，各组感染细胞 LC3-II 表达差异与常规感染模型一致，即 χ3337 感染组细胞高于 χ3306 和 χ3337/pRST98 感染 组，但差异更加显著，p62 表达水平各感染组间差异不显著。 （4）小动物成像仪检测胞内 CFU 结果显示，感染后 1 h，χ3306 和 χ3337/pRST98 感染组胞内 CFU 显著高于 χ3337 感染组（p0.05）；CQ 干预后，各感染组胞内 CFU 无显著差异。饥饿诱导后，χ3306 和 χ3337/pRST98 感染组胞内 CFU 均低于未诱导对照 组（p0.01）。 结论： 1. 伤寒沙门菌质粒 pRST98 可抑制巨噬细胞自噬水平，促进细菌增殖。 2. 伤寒沙门菌质粒 pRST98 对巨噬细胞自噬通量的作用时相为自噬动态过程的早 期阶段，即自噬体形成阶段。 3. 携带质粒 pRST98 的沙门菌感染巨噬细胞时，用药物上调细胞自噬活性，可抑 制细菌增殖，减轻感染。 关键词：伤寒沙门菌；质粒；巨噬细胞；自噬通量 作 者：杨燕茹 指导老师：吴淑燕 Abstract Study on the interaction of Salmonella enterica serovar typhi plasmid with macrophage autophagy flux Study on the interaction of Salmonella enterica serovar typhi plasmid with macrophage autophagy flux Abstract Objective: To investigate the influence of Salmonella enterica serovar typhi (S.typhi) plasmid pRST98 on the dynamic process of macrophage autophagy, and explore whether the plasmid acts on the processes of autophagsome formation or autophagosome-lysosomal fusion in infected macrophages. Through regulating autophagy level, to reveal the effect of plasmid pRST98 on autophagy flux. The aim of this study is to look for a new strategy of prevention and treatment of bacterial infections and to provide experimental basis for new drug research and development. Methods: Study on the interaction of S.typhi plasmid with macrophage autophagy Wild-type S.typhi strain harboring pRST98 ST8, pRST98-deletion S.typhi strain ST8-ΔpRST98 and pRST98-complemented S.typhi strain ST8-c-pRST98 were used to infect mice-derived macrophage-like cell line J774A.1 at a multiplicity of infection (MOI) of 100 bacteria per cell respectively. Some groups of