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关于水稻开闭颖机理的研究 扬州大学 王 忠 顾蕴洁 稻花开闭过程，每隔5分钟拍摄一张 水稻开闭颖在水稻一生中占有重要的地位，因此，了解水稻开闭颖的过程，探讨开闭颖的机理，进而调控开闭颖，这对指导水稻生产，尤其对水稻的杂交育种和制种有着重要的意义。 关于水稻的开闭颖前人已作了许多的研究，一致认为开闭颖是由浆片吸水膨大和失水萎缩引起的。但对浆片吸水和失水的机理，有不同的看法。 有的(仲尾太郎1911)认为浆片吸水是由原先存在浆片中的双糖或多糖转化成单糖使细胞的渗透压提高后引起的； 也有的认为浆片渗透物质的提高来自小穗轴中同化物的输入(Pissarek 1971)； 我们则认为开颖时浆片的吸水受细胞膨压所控制，而膨压的下降依赖于细胞壁的松弛，只要浆片表皮细胞的壁松弛，就会使细胞膨压下降而引起细胞吸水(王忠 2000)。 许多学者都曾观察过环境因素如温度，湿度、光照等对水稻开闭颖的影响，多数人认为温度是影响水稻开闭颖快慢的主要因素，在一定温度范围内，高温促进开闭颖，低温抑制开闭颖(明峰1909，1912；野口1927，1928；丁颖1928) 。 但也有人认为影响开颖的原因不是温度，而是光照(Pissarek 1971；) ，Pissarek发现大麦颖花从暗中移至光下会迅速开颖。 仲尾太郎(1911)认为，湿度不影响水稻的开闭颖，将颖花放在水中能像空气中那样关闭，将颖花放在干燥器中，浆片并不提早萎缩。 然而温度、湿度和光照影响开闭颖的机理不清楚。 1986年我们在用红外线CO2气体分析仪测定稻穗呼吸速率时，发现稻穗开花时呼吸强度升高，且每开一朵颖花有一个CO2释放峰，根据释放峰峰高和颖花内体积，可推算出临开颖时，颖壳内气体中的CO2浓度达到5%。 这一结果启发我们用CO2气体和CO2溶液来处理稻穗，从而发现大于5%的CO2气体和pH小于5.6的CO2溶液对水稻成熟颖花开颖有显著的促进效应，稻穗上凡是成熟的颖花经C02处理l～2min，置空气中5～10分钟后就能全部开颖。 进而我们利用这一效应，观察了水稻颖花，尤其是不育系浆片和小穗轴的超微结构以及它们在开闭颖过程中的变化，研究了环境因素对水稻颖花开闭的影响，初步探明了开闭颖的机理，现把研究结果报道如下： 1 材料与方法 粳稻(Oryza sativa subsp japonica) 武育粳(Wuyujing)， 籼稻(Oryza sativa subsp indica) 汕优63(Shanyou 63)， 珍汕97A(Zhenshan 97A 野败籼型雄性不育系) 珍汕97B(Zhenshan 97B 雄性不育系保育系)等品种。 田间种植或盆栽，常规管理。在开花期取稻穗或颖花做实验。 1.2 不同处理的设置 温度(置不同温度的光照培养箱中)、 湿度(置调温调湿箱中或将穗浸在水中)， 气体成分(稻穗上套塑料袋，向袋内充O2、N2、 CO2等气体)、 光暗变化 CO2水溶液(浸穗)、 化学试剂(浸穗)、 去雄、授粉、 切除小穗轴(用离体颖花，漂在水面上)等处理。 观察各处理对颖花开闭的效应，以及对开闭时间的影响。 1.3 结构观察 用作SEM观察的材料，固定剂为3% GAL(戊二醛)、50mmol/L Caco(二甲基砷酸钠)、pH7.2，乙醇系列脱水，叔丁醇置换，-20℃冷冻干燥，真空镀膜后观察。 用作光镜和TEM观察的材料，以2% GAL、50mmol/L Caco、pH7.2的溶液作前固定，以1%OsO4的溶液作后固定，乙醇系列脱水，环氧丙烷置换，Spurr树脂浸透与包埋。 先制作1?m 半薄切片，TBO染色后用光镜观察显微结构和维管束走向，在此基础上进一步制作50nm的超薄切片，铅和铀双重染色，在透射电镜下观察细胞的超微结构。 1.4浆片鲜重、干重与含水量的测定 经CO2处理的稻穗，开闭颖整齐，且进程与自然开花相同。在颖花开闭颖的不同时期，剥取20朵颖花的浆片，用感量万分之一的电子读数天平快速称取鲜重，然后把浆片烘干称取干重，并求含水率。 含水率=(鲜重―干重)/ 鲜重×100%。 1.5 浆片细胞压力势和渗透势的测定 浆片细胞的压力势的测定是在25℃的恒温室中进行。先小心地用镊子剥除水稻颖花的外颖，把颖花固定在水中，或将离体颖花的小枝梗插入水中，而浆片置在水面上，用细胞压力探针直接测定浆片细胞的压力势。 浆片细胞渗透势的测定 然后让半导体致冷器致冷，当油的温度下降至零下某一温度时，细胞液便凝固，此温度即为细胞液的凝固点，也为水的冰点下降值(△Tf)，根据冰点下降值与溶液质量摩尔浓度(C)的关系式△Tf=1.86C(1.86为水的冰点下降常数)可求出细胞液的质量摩尔浓度(C=△Tf/1.86)即渗透浓度；将C代入渗透势计算公式，就可求出细胞液的溶质