胞质mcsf激活人乳腺癌mcf7细胞pi3kaktmtorp70s6k-cytoplasmic mcsf activates human breast cancer mcf 7 cell pi 3 kaktmtorp 70s 6k.docx

目录（contents）一 主要缩略语英文索引 …………………………………………………1 二 中文摘要 ………………………………………………………………2 三 英文摘要 ………………………………………………………………3 四 论文正文1. 前言 …………………………………………………………………42．实验材料 ……………………………………………………………63．实验方法……………………………………………………………104．实验结果……………………………………………………………155．讨论…………………………………………………………………286．结论…………………………………………………………………31 五 参考文献………………………………………………………………32 六 综述……………………………………………………………………36 七 硕士期间撰写的文章…………………………………………………44 八 致谢……………………………………………………………………45主要英文缩略语索引（Abbreviations）英文缩写英文全名中译名cDNAcomplement DNA互补脱氧核糖核酸PMSFPhenylmethylsulfonyl fluoride苯甲基磺酰氟PAGEpolyacrylamide gel electrophoresis聚丙烯酰胺凝胶泳DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜DEPCdiethyl pyrocarbonate焦碳酸二乙酯RTreverse transctiption逆转录PCRpolymerase chain reaction聚合酶链式反应EBethidium bromide溴化乙啶SDSsodium dodecyl sulfate十二烷基硫酸钠PVDFpolyvinylidene difluoride聚偏二氟乙烯EDTAethylenediamine tetraacetic acid四乙酸乙二胺PI3Kphosphatidylinositol-3-kinase磷脂酰肌醇-3-激酶Aktprotein kinase B蛋白激酶 BmTORmammalian target of rapamycin钠巴霉素的哺乳动物靶子p70S6KRibosomal Protein S6 Kinases,70kD核糖体蛋白质 S6 激酶M-CSFMacrophage colony-stimulating factor巨噬细胞集落刺激因子G418Geneticin新霉素类抗生素PBSphosophate buffered saline磷酸盐缓冲液rpmrevolutions per minute每分钟转数HRPhorseradish peroxidase辣根过氧化物酶KDakilodalton千道尔顿ODoptical density光密度ddH2Odouble distillated H2O双蒸水WBwestern blotting analysis蛋白质免疫印迹检测技术M-CSF 激活人乳腺癌 MCF-7 细胞 PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路硕 士 研 究 生：刘鑫指导教师：唐圣松教授专业名称：药理学中 文 摘 要目的：探讨胞质 M-CSF 对 PI3K/Akt/mTOR/p70S6K 信号通路的影响。方法：常规培养转染 M-CSF 的 MCF-7 细胞（命名为 MCF-7-M 细胞）、转染 空载体 MCF-7 细胞（命名为 MCF-7-C 细胞）和 MCF-7 细胞，用 Western blot 方法 检测其三种细胞 PI3K，Akt，mTOR 和 p70S6K 蛋白质及磷酸化的表达情况；同时 用 RT-PCR 检测其三种细胞 PI3K，Akt，mTOR 和 p70S6K 基因表达水平；PI3K 抑 制剂 LY294002 预孵育上述三种细胞，观察 LY294002 对三种细胞 AKT 磷酸化的影 响。结果：RT-PCR 实验结果显示：MCF-7-M 细胞的 PI3K，Akt，mTOR 和 p70S6K 基因的表达显著高于 MCF-7-C 细胞和 MCF-7 细胞（p＜0.05）。Western blot 实验结 果显示：MCF-7-M 细胞的 PI3K，Akt，mTOR 和 p70S6K 蛋白质的表达及其磷酸化 显著高于 MCF-7-C 细胞和 MCF-7 细胞（p＜0.05）。PI3K 抑制剂 LYZ94002 预孵育 细胞，可明显抑制 MCF-7-M 细胞明显抑制 Akt 蛋白的磷酸化。结论：胞质 M-CSF 可诱导 MCF-7 细胞 PI3K，Akt，mTOR，p70S6K 的 mRNA 与蛋白质的表达及其磷酸化。胞质 M-CSF 可激活 PI3K/ Akt /mTOR/p70S