胞质mcsf对人乳腺癌mcf7细胞抗肿瘤药物抗性的影响-effect of cytoplasmic mcsf on antitumor drug resistance of human breast cancer mcf 7 cells.docx

主要英文缩略语索引（Abbreviations）英文缩写英 文 全 名中 文 名 称M-CSFMacrophage colony-stimulating factor巨噬细胞集落刺激因子cDNAcomplement DNA互补脱氧核糖核MDRmultidrugresistance多药耐药PAGEpolyacrylamide gel electrophoresis聚丙烯酰胺凝胶泳DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜DEPCdiethyl pyrocarbonate焦碳酸二乙酯RTreverse transctiption逆转录PCRpolymerase chain reaction聚合酶链式反应EBethidium bromide溴化乙啶SDSsodium dodecyl sulfate十二烷基硫酸钠PVDFpolyvinylidene difluoride聚偏二氟乙烯EDTAethylenediamine tetraacetic acid四乙酸乙二胺bpBase pair碱基对SDSSDS-polyacrylamide gel eletrophroresisSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳TBSTTween20/ Tris-buffered Saline吐温 20/Tris 缓冲盐溶液HRPHorseradish peroxidase辣根过氧化物酶PBSPhosophate buffered saline磷酸盐缓冲液HPLCHigh efficiency fluid chromatography高效液相色谱法MTT3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-di-phe nyltetrazolium bromide3-(4、5 一二甲基噻唑-2)2,5-二苯四氮唑溴盐胞质 M-CSF 对人乳腺癌 MCF-7 细胞抗肿瘤药物抗性的影响硕 士 研 究 生： 李旎指导教师： 姜浩 教授中 文 摘 要目的：以 MCF-7 细胞、转染空载体的 MCF-7 细胞、稳定转染 M-CSF 的 MCF-7 细胞为模型，探讨胞质 M-CSF 对人乳腺癌 MCF-7 细胞抗药性的影响及 可能机制。方法：采用 MTT 及台盼兰染色法检测细胞的存活率；高效液相色谱法检测 细胞内药物浓度；RT-PCR 鉴定耐药基因 MDR1 的表达；Western Blotting 鉴定细 胞耐药 P-糖蛋白（P-gp）及抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达。结果：对照组转染空载体的 MCF-7 细胞（命名为 MCF-7-C 细胞）和 MCF-7 细胞与实验组转染 M-CSF 的 MCF-7 细胞（命名为 MCF-7-M 细胞）比较：MTT 及台盼兰拒染实验显示细胞在阿霉素（Adriamycin, ADM）、紫杉醇（TAX）等 药物的作用下 MCF-7-M 的存活率均高于对照组细胞（p＜0.05），对照组之间 无显著差异（p＞0.05）。高效液相色谱实验显示：阿霉素同一药物浓度在实验组 MCF-7-M 细胞内的药物浓度明显少于对照组细胞（p＜0.01）；紫杉醇在对照组 中均可测出，且组间差异无统计学意义（p＞0.05），但实验组 MCF-7-M 细胞内 由于药物浓度过低仪器未检测。RT-PCR 实验显示 MCF-7-M 细胞的 MDR1 基因 表达量较 MCF-7-C 细胞和 MCF-7 细胞高（p＜0.01）。Western blot 实验显示 MCF-7-M 细胞的 Bcl-2、P-gp 蛋白表达量高于 MCF-7-C 细胞和 MCF-7 细胞（p＜0.01）。结论： 胞质 M-CSF 能增加人乳腺癌 MCF-7 细胞对阿霉素和紫杉醇的抗性，降低细胞内阿霉素和紫杉醇的浓度；胞质 M-CSF 上调 MCF-7 细胞 MDR1基因、P-gp 和 Bcl-2 蛋白的表达。关键词： M-CSF；MCF-7 细胞；抗肿瘤药物；多药耐药。EFFECTS OF CYTOPLASMIC M-CSF ON THE SENSITIVITY OF ANTI-TUMOR CHEMOTHERAPEUTIC DRUG IN HUMAN BREAST CANCERABSTRACTOBJECTIVES: To explore mechanism and effects of cytoplasmic M-CSF on the sensitivity of anti-tumor chemotherapeutic drug in human breast cancer cells. METHODS: The effect of cytoplasmic M-CSF on the sensitivity of anti-tumorchemotherapeutic drug of