捕食线虫性真菌分离与生物学特性分析-isolation and biological characteristics analysis of nematode - predating fungi.docx

中文摘要本文对寄生虫生物防治及捕食线虫性真菌的研究历史、现状及发展方向进行了系统的 中文摘要 本文对寄生虫生物防治及捕食线虫性真菌的研究历史、现状及发展方向进行了系统的 阐述。并采用微生物学、生物化学和寄生虫学实验技术，从捕食线虫性真菌的分布规律、 分离培养技术、形态学结构、生长特性、捕食活性、捕食效力、杀虫机理、杀虫作用等诸 方面进行了深入的生物学特性研究和探讨6f结果如下： 从自然界中分离到两类活性较强的捕食线虫性真菌菌株：即套捕型捕食线虫性真菌和 粘捕型捕食线虫性真菌，它们具有菌环、菌网或菌结捕食性结构。这些捕食线虫性真菌在 分生孢子、捕食性结构及其它生物学特性上有一定差异。描述了三种代表性的菌株，其中 9actylaria py，，，Dmj娟自株为国内新记录。研究显示土壤和粪便的平均分出率为39．2％。， 在培养基中加入双抗(青链霉素)。可提高首此分离的分出率． 在借鉴国外分离培养捕食线虫性真菌方法的基础上，在国内研究出了以0．49／L玉米粉 琼脂培养基作为主要培养基，分离培养捕食线虫性真菌的实验室技术。其成本低、操作简 便、效果好、重复性强，弥补了我国在这方面的空白。 作者在捕食线虫性真菌种类鉴定方面提出了自己的观点：认为鉴定捕食线虫性真菌除 应依据分生孢子形态外，还应根据捕食性结构等形态学特征及某些生长特性，必要时可结 合分子生物学技术来综合进行种类的确定。 捕食线虫性真菌分生孢子对低温冷冻有极强的耐受力，可用低温冷冻法保存捕食线虫 性真菌分生孢子，其方法简便易行．首次解决了国内外在捕食线虫性真菌菌种保存中的难 题。 另外，作者还提出了0．49／L玉米粉液体培养基(删A)保存菌种的方法． 作者证实线虫体内确实存在着可以诱导捕食性结构产生的物质。但其作用是很有限的。 捕食线虫性真菌菌株对线虫第一、二期幼虫和第三期幼虫的作甩比较说明．第三期幼虫可 以刺激菌株产生较多的捕食性结构．作者首次研究证明线虫虫卵、线虫成虫不能导致捕食 性真菌产生捕食性结构。 试验结果表明捕食线虫性真菌菌株批量培养最适宜的培养基是玉米粒，在20C培养3 周后，分生孢子产生的数量最多。而且纯净。没有发芽。适于收集使用．为今后捕食线虫 气0性真菌的实际应用奠定了基础。 气0 性真菌的实际应用奠定了基础。 捕食线虫性真菌一少孢节丛孢菌菌株分生孢子在体外对绵羊瘤胃液、真胃液、十二指 肠液具有耐受力，在通过兔子消化道后仍能存活；另外，DactyJarJa pyriformis菌株给 绵羊口服后所产生的杀虫效果及试验动物粪便真菌培养证实Bactylaria pyriformis菌株 可以通过绵羊消化道；该菌株是继国际上Ouddingtonia f]agrans真菌之后，又一个具有 · 开发潜力的捕食线虫性真菌。 ；ln、h 捕食线虫性真菌菌株在0．49几玉米粉琼脂培养基上，对自然混合感染马的线虫第三期 幼虫捕食率为78．2～80．1％；在实验室条件下，少孢节丛孢菌菌株对马粪便中线虫幼虫的杀 虫率高达98．7％；与对照组相比有显著差异。而且加入粪便的分生孢子数量在达到一定阈值 后，再加入分生孢子，则杀虫率不再增加。此结论对捕食线虫性真菌今后临床的应用具有 实际指导意义。 临床初步应用研究试验表明：Dactylaria pyriformis菌株悬浮液制剂在外界自然环 境条件下，喷洒于粉碎的马粪和羊粪中，对粪便线虫幼虫的杀虫率分别可达98．05％。以 3×107或6×107个孢子剂量，给羊经口分2次投服，对线虫幼虫的杀虫率分别可达89．9啸 92．8％。上述结果为将来捕食线虫性真菌用于动物寄生性线虫病防治，展现了光明的前景。 基于18S rDNA序列，作者首次利用分子生物学技术，在国内对捕食线虫性真菌一一少孢 节从孢菌菌株的种类鉴定及种系发育进化进行了研究。结果显示：捕食线虫性真菌——少 孢节从孢菌Al株(Arthrobotrys oligospora AI)的18S rDNA全基旦度虱为1769bp，在进 化树上与同种国外的2个分离株的同源性分别为94．7％和93．1％。此结果与捕食性结构的 特点相一致。进化树及同源性比较表明丛孢菌属(Arthrobotrys)确实存在有株的差异．试 验还证实捕食线虫性真菌的捕食性结构与其种系发生有关。∥ ＼ ．， ／。 }、固妒，』≮。 关键词：生物控制；捕食线虫性真菌；(夯蓠；7生物学特性：线《I f7。，／ (附图48幅，表40个) II ABSTRACTStudies ABSTRACT Studies on Isolation and Biological Properties ofNematode-trapping Fungi (College ofVeterinary Me