奥曲肽对结肠癌细胞凋亡及gsk3β的影响-effects of octreotide on apoptosis and gsk 3β in colon cancer cells.docxVIP

目 录 目录1 中英文缩略词表2 中文摘要3 英文摘要 6 前言 9 材料与方法11 结果18 讨论28 结论34 参考文献35 综述41 攻读硕士学位期间完成、发表论文情况50 致谢51 中英文缩略词表 缩略词 英文全称 中文全称 GSK-3β glycogen synthase kinase-3β 糖原合成酶激酶-3β GSK3β (Phospho-Tyr216) Phospho-Tyr216-glycogen synthase kinase-3β 216 位点酪氨酸磷酸化糖原 合成酶激酶-3β GSK3β (Phospho-Ser9) Phospho-Ser9-glycogen synthase kinase-3β 9 位点丝氨酸磷酸化糖原合 成酶激酶-3β SS somatostatin 生长抑素 OCT octreotide 奥 曲 肽 Ser serine 丝氨酸 Tyr tyrosine 酪氨酸 MAPK mitogen activated proteinkinase 有丝分裂原激活的蛋白激酶 PI3-K phosphatidylinositol 3 kinase 磷脂酰肌醇(-3)激酶 TCF T cell factor T 细胞因子 LEF lymphocyte enhancer factor 淋巴增强因子 PBS phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲溶液 MTT methyl thiazolyl tetrazolium 甲基噻唑基四唑 SDS sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺 凝胶电泳 PVDF polyvinylidene difluoride 聚偏(二)氟乙烯 PMSF phenylmethansulfonyl fluoride 蛋白酶抑制剂 APS ammonium persulfate 过硫酸胺 Tris tris-(hydroxymethyl) aminomethane 三羟基甲基氨基甲烷 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 TEMED N,N,N´,N´-tetramethyl-ethlene diamine 四甲基乙二胺 TBE Tris/borate/ EDTA(buffer) Tris/硼酸/EDTA 缓冲液 AO/EB Acridine orange/ ethidium bromide 丫啶橙/溴化乙啶 奥曲肽对结肠癌细胞凋亡及 GSK-3β的影响 硕士研究生：龙建武 硕士生导师：梁庆模 教授 中 文 摘 要 目的 研究不同浓度生长抑素类似物奥曲肽抑制结肠癌 SW480 细胞生长增殖作用以及 诱导凋亡的作用；探讨奥曲肽对结肠癌细胞 Wnt/β-catenin 信号传导通路中 GSK-3 β、GSK-3β(Phospho-Ser9)及 GSK-3β(Phospho-Tyr216)蛋白表达水平的影响， 阐述奥曲肽抗肿瘤作用机制及靶点，以进一步研究分析生长抑素抗肿瘤作用机 制，为寻找具有开发前景的 Wnt/β-catenin 信号传导通路候选药物提供实验和理 论依据。 方法 1 体外培养人结肠癌 SW480 细胞作为研究对象。 2 奥曲肽对人结肠癌 SW480 细胞生长增殖的抑制作用 2.1 MTT 比色法测定不同浓度奥曲肽抑制 SW480 细胞增殖作用，以效价强度最 高者为最佳抑制浓度。 2.2 平皿集落形成法测定奥曲肽抑制体外培养 SW480 细胞的锚定依赖性生长作 用。 3 奥曲肽诱导人结肠癌 SW480 细胞凋亡作用 3.1 AO/EB 染色荧光显微镜观察奥曲肽诱导 SW480 细胞凋亡的形态学改变。 3.2 DNA 凝胶电泳证实奥曲肽诱导 SW480 细胞凋亡作用。 4 奥曲肽对 SW480 细胞内 GSK-3β磷酸化水平的调节作用 4.1 应用 Western-blot 法分析不同浓度奥曲肽对 SW480 细胞中 GSK-3β蛋白表达 的影响。 4.2 应用 Western-blot 法分析奥曲肽对 SW480 细胞中 GSK-3β(Phospho-Tyr216) 蛋白表达的影响。 4.3 应用 Western-blot 法分析奥曲肽对 SW480 细胞中 GSK-3β(Phospho-Ser9)蛋白 表达的影响。 结果 1 奥曲肽对人结肠癌 SW480 细胞生长增殖的抑制结果 1.1 MTT 比色法测定结果显示：不同浓度奥曲肽对 SW480 细胞增殖活性具有不 同程度的抑制作用，10-12 M、10-10 M、10-8M、10-6M（mol/L）奥曲肽处理 SW480 细胞后，对生长增殖的抑制率分