白藜芦醇预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经元的保护作用及其机制-protective effect of resveratrol preconditioning on neurons after focal cerebral ischemia-reperfusion injury in rats and its mechanism.docxVIP

英文缩略词 英文略写英文全名中文名AIapoptotic index凋亡指数AMPKadenosine monophosphate -actived protein kinase腺苷酸活化蛋白激酶CIRIcerebral ischemia-reperfusion injury脑缺血再灌注损伤CCAcommoncarotid artery右颈总动脉CA1hippocampus CA1海马 CA1 区ECAexternal carotid artery颈外动脉细胞外信号调节激酶ERK1/2extracellular signal-regulated kinase1/2途径ICAinternal carotid artery颈内动脉IPCischemic preconditioning缺血预处理MCAOmiddle cerebralartery occlusion大脑中动脉栓塞MCAOmiddle cerebral artery occlusion大脑中动脉闭塞有丝分裂启动蛋白激MAPKmitogen activated protein kinase酶PI3K-Aktphosphatidylinositol-3-kinase/serine threonine kinase磷脂酰肌-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶ROSreactive oxygen species活性氧Resresveratrol白藜芦醇TTC2,3,5-triphenyltertrazolium chloride2,3,5- 氯化三苯基四 氮唑末端脱氧核糖核酸转terminal deoxynucleotidyl transferase- mediated dUTP移酶介导的缺口末端TUNELnick-endlabeling标志法摘 要白藜芦醇预处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤 神经元的保护作用及其机制目的脑缺血性疾病是神经系统常见病症，其中以缺血再灌注损伤导致神经元凋亡 所引起的继发性脑损伤危害最大，常导致严重的神经功能障碍。而缺血预处理可 以减少脑缺血性损伤，减少细胞的凋亡及坏死。白藜芦醇（Resveratrol，Res）是 脑缺血性疾病有效的神经保护剂，但其作用机制尚不明确。本研究采用颈内动脉 栓线法制备大脑中动脉栓塞 (middle cerebral artery occlusion, MCAO）脑缺血模型， 在缺血前1 h经腹腔注射白藜芦醇（30 mg/kg），通过TTC染色法观察大鼠脑梗死面 积，缺血再灌注后第5天，取大鼠脑组织固定包埋，采用原位细胞凋亡检测（TUNEL 法）、免疫组织化学等方法检测大鼠海马CA1区神经元凋亡情况、相应凋亡蛋白及p-ERK的表达，以期能够对Res的神经保护作用机制进行进一步探讨，从而为临床 研发预防脑血管疾病的新药提供实验依据。方法1 动物分组 雄性SD大鼠60只，体重220～250 g，清洁级。随机分为三组：假手 术组（Sham）、模型组（I/R）、白藜芦醇预处理组 ( Res + I/R）每组20只。2 局造性脑缺血再灌注模型制备 大鼠用10%水合氯醛麻醉后，仰卧位固定于手术 台上，颈部正中切口，分离右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉，用玻璃分针轻 轻剥离迷走神经。颈外动脉切口，插入MCAO栓线，转过颈总动脉分叉进入颈内 动脉，然后缓缓插入，至有轻微阻力时为止（自分叉处约20 mm）阻断大脑中动脉 的所有血供。缺血90 min后，轻轻拔出MCAO栓线，恢复血供进行再灌注，缝合伤 口，把大鼠放入笼中。在实验过程中使用加热电毯保持动物直肠体温(37±0.5)°C左 右。我们通过这种方法制备的模型，大鼠神经元损伤比较稳定，说明这种方法是 可复制的。3 TTC染色测定脑梗死范围 再灌注后24 h，大鼠经水合氯醛麻醉后，迅速断头取脑，切成2 mm厚的脑片，共5片。置于2%的TTC染液中37°C染色30 min显示脑梗死 范围。4 原位细胞凋亡检测（TUNEL法）检测海马神经元细胞凋亡 在缺血再灌注后第5天，大鼠经水合氯醛麻醉后，经心脏灌注4%多聚甲醛固定至大鼠四肢僵硬，取出 缺血侧脑组织放入相应固定液中于4°C冰箱中固定过夜。截取视交叉至大脑横裂的 部分，常规石蜡包埋，连续冠状切片，片厚4 μm。按TUNEL检测试剂盒进行操作， 检测海马CA1区神经细胞凋亡情况。5 免疫组织化学检测凋亡相关蛋白的表达 每只动物取上述石蜡标本连续切片各3张，采用过氧化物酶标记的链霉卵白素（SP）法进行免疫组化染色和DAB显色法 显色，检测相关凋亡蛋白PI3K、p-Akt及Caspase-3的表达，并检测ERK1/2信号转导 通路是否参与白藜芦醇的抗神经元凋亡的作用。6 统计学分析 计量资料均以?x ± s表示，所有数据采用SPSS13.0统计软