白血病细胞来源微泡水平传递bcr-abl1融合基因及其蛋白恶性改造间充质干细胞-leukemia cell-derived microbubbles deliver bcr - abl 1 fusion gene and its protein to malignant transformed mesenchymal stem cells.docxVIP

英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称CMLChronic myelogenous leukemia慢性髓性白血病MSCsMesenchymal stem cells间充质干细胞CLLChronic lymphocytic leukemia慢性淋巴细胞白血病MP/MVMicroparticle / microvesicle微粒/微泡TMVTumor microvesicle肿瘤来源的微粒EGF/REndothelial growth factor/receptor内皮生长因子/受体TGF-β1Transforming growth factor β1转化生长因子 β1MMPMatrix metalloproteina基质金属蛋白酶CXCR4CXC Chemokine Receptor-4趋化因子受体 4ERKLICExtracellular signal-regulated kinaseLeukemia-initiating cells胞外信号调节激酶白血病起始细胞MRDMinimal residual disease微小残留病灶EMTEndothelial-mesenchymal transition内皮间质转化HIF-1αHypoxia-inducible factor-1α低氧诱导因子-1αSDF-1Stromal cell derived factor-1基质细胞衍生因子VEGFVascular endothelial growth factor血管内皮生长因子NF-кBNuclear Factor –кB核因子-kappa BTKI/IMTyrosine kinase inhibitor/Imatinib酪氨酸激酶抑制剂/伊马替尼VCAM-1Vascular cell adhesion molecule-1血管内皮粘附分子-1ICAM-1Intercellular adhesive molecule-1细胞间粘附分子-1FOXOForkhead box O叉头框 OSCFStem cell factor干细胞生长因子ILKmTORIntegrin-linked kinaseMammalian target of rapamycin整合素相关激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白白血病细胞来源微泡水平传递 BCR-ABL 融合基因及其蛋白恶性改造间充质干细胞中 文 摘 要 目的：肿瘤细胞与肿瘤微环境组分尤其是间充质干细胞（MSCs）存在丰富的信息交 流，在肿瘤疾病进展中具有非常重要的作用。但是，肿瘤细胞与 MSCs 进行对话（cross-talk）的确切机制尚不清楚。本课题以 K562 白血病细胞为模型，研究白血病 细胞来源微泡（MVs）对 MSCs 的影响及其分子机制，意在阐明肿瘤相关病理机制 并为开发新的肿瘤治疗策略提供思路。 方法：应用新型全骨髓贴壁培养法分离培养人 MSCs，通过细胞形态特征、表面标记 和多向诱导分化等进行鉴定；差异离心法分离 K562-MVs，应用激光共聚焦、透射电 镜和流式细胞术观察其特征。RT-PCR 及 Western-blot 证实 K562-MVs 和 MSCs 内 BCR-ABL1 mRNA 及蛋白的表达。激光共聚焦显微镜观察 K562-MVs 与 MSCs 的融 合过程。MTT 和 CCK8 检测 K562 和 MSCs 增殖；RT-PCR 及 ELISA 观察 K562-MVs 对 MSCs 分泌细胞因子的影响；采用 RNase 酶消化 MV 中的 RNA 组分，初步探讨 MV 改造 MSCs 的机制。结果：采用新型全骨髓贴壁培养法成功分离培养人 MSCs，经鉴定其符合 MSCs 表型， 并具有多向分化能力。体外观察到 K562 细胞可分泌大小不一、直径约为 0.1-1μm 的 球形 MVs，并证实 K562-MVs 内表达 BCR-ABL1 mRNA 及融合蛋白。激光共聚焦显 微镜显示 K562-MV 能够通过直接融合方式进入 MSCs，部分进入细胞核内。 K562-MVs 与 MSCs 的融合能够将 BCR-ABL1 mRNA 及其蛋白水平传递至 MSCs 内， 促进 MSCs 分泌 TGF-β1、SCF 和 MMP-9 等细胞因子。同时，K562-MVs 改造的 MSCs 能够通过 TGF-β1 促进 K562 细胞增殖。结论：K562-MVs 通过水平传递 BCR-ABL1 融合基因及其蛋白改造 MSCs，是白血病 细胞与白血病微环境进行交叉对话的新型载体。阻断肿瘤细胞来源 MV 的释放或干扰 MVs 内容物的传递可能会成为阻止肿瘤疾病进展的一种新策略。关键词：白血病，微泡，间充质干细胞，BCR-ABL1，恶性改造本课题受国家科学自然基金（No.No. 810