变异链球菌cat-paca-ctxb-dock8dhr融合基因表达质粒的构建-construction of fusion gene expression plasmid of streptococcus mutans cat - paca - ctx b - dock 8d hr.docxVIP

目 录 1.论文：变异链球菌 cat-pacA-ctxB-DOCK8/DHR 融合基因表达 质粒的构建 中英缩略词对照表…………………………………………1 中文摘要……………………………………………………2 英文摘要……………………………………………………4 前言…………………………………………………………6 实验一………………………………………………………10 实验二………………………………………………………28 讨论 …………………………………………………………37 全文总结…………………………………………………… 42 参考文献…………………………………………………… 43 2.综述（一）………………………………………………………46 3.综述（二）………………………………………………………57 4.致谢……………………………………………………………61 5.作者简介………………………………………………………62  缩略词 中英文缩略词表 英文全称 中文全称 Amp Ampicillin 氨苄青霉素 bp base pair 碱基对 cDNA complementary DNA 互补 DNA CTB cholera toxin B subunit 霍乱毒素 B 亚单位 ddH2O DNA Deionized distilled water deoxynucleiside acid 去离子蒸馏水 核糖核酸 DMSO dimethy sulfoxide 二甲基亚砜 DOCK8 Dedicator of cytokinesis 8 无功能糖基转移酶样蛋白 E.coli Escheria Coli 大肠杆菌 EDTA ethylene diaminetetra-acetic acid 乙二胺四乙酸 GTFs Glucosyltransferse 葡糖基转移酶 Kan Kanamycin 卡那霉素 MCS multiple cloning site 多克隆位点 mRNA messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸 Tris Tris(hydroxywethl) aminomethane 三（羟基）氨基甲烷 TE Tris-EDTA buffer TE 缓冲液 OD Optical density 光密度 PAGE SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 RT-PCR reverse transcription 逆转录 PCR SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 S.mutans Streptococcus mutans 变异链球菌 1  变异链球菌 cat- pacA-ctxB-DOCK8/DHR 融合基因表达 质粒的构建 中文摘要 目的：构建含有变异链球菌表面蛋白 A 区编码基因 pacA 和葡糖基转移酶（GTF） 催化区编码基因 cat，佐剂 CTB 的编码基因 ctxB 和靶向蛋白 DOCK8 核心功能区 DHR 编码基因的融合基因表达质粒，利用番茄果实特异性启动子 E8 启动融合蛋白的表达， 添加柔性肽基因修饰，构建稳定高效的番茄果实特异表达质粒，为下一步转化番茄植 株提供实验基础。 方法：实验共分二部分： 第一部分 变异链球菌 cat-pacA-ctxB-DOCK8/DHR 融合基因表达质粒的构建 ①设计特异引物，通过 PCR 获得变异链球菌表面蛋白 PAC 的编码基因 pacA、葡 糖基转移酶编码基因 cat、无功能糖基转移酶样蛋白（DOCK8）的核心功能区 DHR 编码基因；②T-A 克隆构建中间载体 pMD-cat、pMD-pacA-ctxB、pMD-DOCK8/DHR 质粒；③酶切 pMD-cat、pMD-pacA-ctxB、pMD-DOCK8/DHR 质粒获得目的基因，通 过 定 向 克 隆 与 pET32a(+) 表 达 载 体 进 行 重 组 ， 获 得 重 组 质 粒 pET-cat-pacA-ctxB-DOCK8/DHR； 第二部分 植物表达质粒 p2301-E8-cat-pacA-ctxB-DOCK8/DHR 的构建 限制性内切酶酶切 pET-cat-pacA-ctxB-DOCK8/DHR 获得融合基因片段 cat-pacA-ct xB-DOCK8/DHR，经定向克隆与植物转化载体 pCAMBIA2301 重组，加入从番茄基 因组中所提出的番茄果实特异性启动子 E8，获得植物表达质粒 p2301-E8-cat-pacA-ct xB-DOCK8/DHR。 结果： 1）构建的表达质粒 pET-