毕赤酵母p.pastoris的rhil-1表达量与载体—受体相关性研究分析-study on the correlation between expression of rhil - 1 and vector - receptor in pichia pastoris p. pastoris.docxVIP

洲Y 洲2 Ⅲ5 ㈣5 舢0 ㈣5Ⅲ8㈣9摘要白细胞介素1(IL一1)家族主要包括白细胞介素la(IL．1a)、白细胞介素1D(IL．1p)、 门细胞介素1受体拈抗剂(IL．1Ra)等11个成员，是细胞因子网络中的关键成分。IL．1|，f勺，』i物学活性非常，。泛，例如，激活造血系统和免疫系统，刺激淋巴细胞增殖，诱导单 核细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞的抗肿瘤活性。因此，用基因工程技术表达该类蛋白， 自‘重要的意义和应用价值。目前，常用的表达重组蛋白的毕赤酵母菌株有：GSl 15、KM71、X一33、SMD系列 等。常用的分泌型表达载体有：pPIC9K、pPIC9、pPICZotA等。为了解不同的载体．受体组合对rhIL—l表达的影响，本文选择IL一1Q、IL一1B和IL一1Ra三个基因，GSll5、SMDl 168和X一33三种受体菌，pPIC9K、pPIC9和pPICZaA三种载体，按排列组合原 910构建它们的工程菌和检测它们的最佳表达量。结果表明，在rhlL．1a的表达中，X一33受体／pPICZaA载体组合的表达量最高， 约为O．346 mg／L。其他为：X-33／pPICZctAGSll5／pPICZaAGSl 15／pPIC9K GSll5／pPIC9SMDll68／plPICZaASMDll68／pPIC9KSMDll68／pPIC9。在rhlL-16 的表达中，X．33受体／pPICZaA载体组合的表达量最高，约为O．553 mg／L，其他为： X一33／pPICZaAGSll5／pPICZaAGSll5／pPIC9KGSll5／pPIC9SMDll68／ pPICZaASMDl 168／pPIC9KSMDl 168／pPIC9。在rhlL．IRa的表达中，X一33受体／pPICZaA载体组合的表达量最高，约为0．385 mg／L，其他为：X一33／pPICZaA GSll5／pPICZaAGSll5／pPIC9KGSll5／pPIC9SMDll68／pPICZaASMDll68／ pPIC9KSMDl 168／pPIC9。比较rhlL一1 0【、rhlL一1D、rhlL—IRa等的最佳表达量发现，rhlL一1p的X一33受体／pPICZotA载体的表达量rhlL．1Ra的表达量rhlL一1Q的表达量。表明：rhlL．1的表达 超与载体一受体组合密切相关，其中，X．33／pPICZaA组合表达三种rhlL．1的能力最强， SMDll68／pPIC9组合表达三种rhlL一1的能力最弱。另一方面，rhlL一1的表达量也与IL一1 的种类相关，其中，rhlL．1 B表达量最高，rhlL一1Ra次之，rhlL．1 Q的表达量略少于rhlL一1 Ra。关键词毕赤酵母，工程菌，表达载体，受体菌，重组人白细胞介素l11ABSTRACTThere are 11 members in Interleukin一1(IL一1)family mainly including interleukin一1 0【(IL一1Ⅱ)、 interleukin。1 p(IL一1 p)and interleukin一1 receptor antagonist(IL一1 Ra)，which are the key ingredients of cytokine network—IL一1 has a very wide range of biological activities，for example，activating the hemopoietic system and immune system，stimulating lymphocyte proliferation，inducing the antitumor activity of mononuclear cells、macrophages and natural killer cells。Therefore this kind of protein expression with the genetic engineering technology,has an important significance and application value．At present，the commonly used Pichiapastorstrains that express recombinant proteins are：GS 1 1 5、 KM7 1、X一33、SMD，etc．The common types of excretive expression vector are：pPIC9K、pPiC9、 pPICZcIA，etc．To study t