不同刺激物对大鼠吞噬细胞吞噬能力及[ca2 ]i浓度影响-effect of different irritants on phagocytic ability and [ ca2 ] i concentration of rat phagocytes.docxVIP

i不同刺激物对大鼠吞噬细胞吞噬能力及胞内钙离子([Ca2+] )浓度的影响摘要目 的：巨噬细胞和中性粒细胞的反应性对炎症过程至关重要。本研究观察 N- 甲酰 - 甲 硫 氨 酰 - 亮 氨 酰 苯 丙 氨 酸 （ N-formyl-methionyl-leucy1-phenylalanine ， fMLP）、豆蔻酰佛波醇乙酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）及白三烯 B4(Leukotriene B4，LTB4)诱导大鼠腹腔巨噬细胞和中性粒细胞吞噬能力的变化， 并以细胞内游离钙离子浓度（[Ca2+]i）为指标，测定了静息状态下腹腔巨噬细胞 和中性粒细胞内[Ca2+]i 水平及其对 fMLP、PMA、LTB4 的反应性。方法：大鼠腹腔内注射 5%明胶生理盐，16h 后脱颈处死，灌洗腹腔并收取腹 腔渗透液，洗涤后，通过密度梯度离心法分离巨噬细胞及中性粒细胞。对分离后 得到的巨噬细胞及中性粒细胞进行以下两方面的研究：1.使用荧光显微镜和相差 显微镜对中性粒细胞和巨噬细胞对荧光微球和酵母多糖的吞噬能力的检测。2. 将分离的吞噬细胞用 Fura-2/AM（终浓度为 5μmol/l）负载 1h，洗涤去除未进入 细胞内的 Fura-2/AM，采用细胞内离子测定仪（双波长荧光分光光度计），在激 发波长为 340nm 和 380nm，发射波长为 510nm 条件下测定细胞内[Ca2+]i 的动态 变化。结果：1.静息状态下，巨噬细胞对荧光微球的吞噬能力显著大于中性粒细胞； 经 fMLP、PMA、LTB4 诱导后，巨噬细胞及中性粒细胞对荧光微球的吞噬能力增 强。2.静息状态下，巨噬细胞内[Ca2+]i 浓度高于中性粒细胞；不同浓度 fMLP、 PMA 及 LTB4 作用下，[Ca2+]i 变化都具有浓度依赖性；经 LTB4 诱导，[Ca2+]i 呈 一过性增高，持续时间较短，约大概 1min 后恢复到静息状态的浓度；经 fMLP 诱导后，[Ca2+]i 亦呈一过性增高，但持续时间较长，其[Ca2+]i 浓度缓慢下降，具 有时间和浓度依赖性；在高浓度的 fMLP 刺激下，约 10min 后恢复到静息状态的 浓度；经 PMA 诱导后，[Ca2+]i 增高幅度最大，持续时间最长，观察 45min 后也 无下降趋势。结论：中性粒细胞与巨噬细胞的吞噬能力不同；fMLP、PMA 及 LTB4 能诱导大鼠中性粒细胞与巨噬细胞的的吞噬能力提高；fMLP、PMA 及 LTB4 诱导引起大鼠中性粒细胞与巨噬细胞[Ca2+]i 浓度发生浓度依赖性增高，持续时间也各不相 同。该研究结果显示，不同刺激物对细胞的活化途径不同，而吞噬细胞的反应性（活化程度）也不同。[关键词]大鼠；中性粒细胞；巨噬细胞；吞噬能力；胞内钙离子浓度 中图分类号 R392文献标识码A英文摘要Different irritants on the rat phagocyte capacity and Intracellular calcium concentration [ Ca2+]iAbstractObjectiv: The response of macrophages and neutrophils, plays an important role in the inflammatory process. The current study found that fMLP, PMA and LTB4 - induced peritoneal macrophages and neutrophils and the two cells in intracellular free calcium concentration changes [Ca2+]i phagocytic function, such as different styimulus. Intracellular free calcium concentration and measured the resting peritoneal macrophages and neutrophils [ Ca2+]i levels and reactivity of fMLP , PMA , LTB4.Method:Abdominal lavage and charge abdominal permeate, after washing, macrophages and neutrophils isolated by density gradient centrifugation.1, Using of fluorescence microscopy and phase contrast mic