不同消化性疾病来源的幽门螺杆菌毒力基因caga vaca oipa dupa的检测及其意义-detection of helicobacter pylori virulence gene caga vaca oipa dupa from different digestive diseases and its significance.docxVIP

目 录 中文摘要---------------------------------------------------------4 英文摘要---------------------------------------------------------7 正文 前言-----------------------------------------------------10 材料和方法-----------------------------------------------12 结果-----------------------------------------------------16 讨论-----------------------------------------------------27 结论-----------------------------------------------------32 参考文献-------------------------------------------------33 综述------------------------------------------------------------37 参考文献-------------------------------------------------42 致谢------------------------------------------------------------46 3 中 文 摘 要 [背景和目的] 幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，以下简称 Hp）是引起胃炎、消化性溃疡、 胃粘膜淋巴组织相关性淋巴瘤和胃癌的重要病原体。全球约有一半以上人口感染 Hp，但在感染人群中只有约 20%发生消化性疾病，且疾病的严重程度不同，其 原因尚未阐明，可能与细菌基因高度多态性、宿主和环境等因素有关。Hp cagA、 vacA、oipA、dupA 四种毒力基因是幽门螺杆菌致病的重要因素。幽门螺杆菌感 染的特点，主要体现在菌株基因多态性和地区分布差异性，且各种基因与疾病之 间的关系也有地区差异性。本研究旨在调查胃癌高发的福州地区的 Hp cagA 及 其 C 端的 EPIYA 基序、vacA 和 dupA 分型以及 oipA 基因开关状态，了解本地 区的幽门螺杆菌基因多态性，并探讨本地区消化性疾病与这些基因、性别和年龄 之间的关系，以便对幽门螺杆菌的致病机制有更加深入的认识。 [材料和方法] 1．幽门螺杆菌的分离与鉴定：从福建省肿瘤医院，福建医科大学附属协和 医院和福建省立医院采集的胃组织标本（来自慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患 者），分离培养 Hp，组织研磨后接种于布氏平板，于厌氧培养箱培养 3-5d，经尿 素酶、过氧化氢酶及形态学鉴定确认。 2． 用高纯度基因组 DNA 模板提取试剂盒（购自罗氏公司）提取 Hp 基因 组 DNA，并以其为模板，PCR 扩增 cagA 3′端序列、vacA 基因 s 区、i 区、m 区、oipA 信号区、dupA（jhp917 和 jhp918）基因。 3． cagA 3′端和 oipA 信号区 PCR 后送生工生物（上海）有限公司，sanger 法，ABI-PRISM3730 测序仪进行基因测序，Bioedit 分析软件分析 EPIYA 基序类 型和 oipA 基因开关状态。 4． 统计分析：运用方差分析比较各疾病组之间年龄的差异，卡方检验分析 疾病与各基因之间的关系，logistic 回归分析各疾病组之间的基因差异。 [结果] 1. 分离培养获得 82 株幽门螺杆菌，其中分离自慢性胃炎患者 37 株，消化 性溃疡患者 25 株（其中胃溃疡 12 株，十二指肠溃疡 13 株），胃癌患者 20 株。 疾病与性别和年龄的关系：单因素卡方分析胃炎，消化性溃疡和胃癌组间性别差 4 异，χ2=7.39，P0.05，P=0.022，差异有统计学意义，表明消化性溃疡和胃癌患 者中男性比例高于胃炎患者中男性的比例；方差分析三组疾病间年龄差异， F=1.51，P0.05，P=0.227，差异无统计学意义。 2. 基因检测及统计学分析结果：所有被测菌 cagA 基因均为阳性， EPIYA 分型结果：胃炎菌株：EPIYA-ABD 32 株（86.5%），EPIYA-AD 1 株（2.7%）， EPIYA-ABBD 4 株（10.8%）；消化性溃疡菌株： EPIYA-ABD 23 株（92%）， EPIYA-AB 1 株（4%），EPIYA-ABBD 1 株（4%）；胃癌菌株：EPIYA-ABD 19 株 （95%），EPIYA-ABBD 1 株（5%）, EP