白芷抗癌活性成分分析-analysis of anticancer active components of angelica dahurica.docx

摘要摘要近年来，以一些与肿瘤细胞分化增殖相关的信号转导通路的关键酶为药物筛选靶点，发现作用于特定靶位的高效、低毒、特异性强的新型药物已成为当今抗肿瘤药物研发的重要方向。Shp2(Srchomology2domaincontainingproteintyrosinephosphatase-2)是第一个确定的具有磷酸酶活性的促肿瘤蛋白，而Shp2抑制剂的发现对的新型抗癌药物的开发具有重要意义。中草药在中国已有几千年的药用历史，其成分多样性和结构复杂性的优势一直受到药物开发者的青睐。我们用Shp2抑制剂的高通量模型筛选了来源于植物库中的2000多个馏分，发现白芷60％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分具有特异性抑制Shp2活性的作用。通过综合运用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、凝胶柱色谱、分析型与制备HPLC及重结晶等方法，对此活性部位进行了系统的分离，得到34个单体化合物。通过NMR、质谱、熔点及理化性质等手段对化合物的结构进行了鉴定，其中，1个为新化合物，15个为白芷中首次分离。通过Shp2抑制剂高通量筛选模型对所有化合物进行了筛选，发现化合物4、7、9、24、30和32六个化合物对PTP．Shp2具有特异性抑制作用，其IC50为17．2．64．1gM。为了进一步研究Shp2抑制剂能否促进细胞凋亡及抑制细胞生长，我们检测了HepG2细胞中PARP的表达，caspase的活性，及化合物对细胞生长的抑制作用。结果显示，化合物9(二十三碳二烯酸)和13(别欧前胡素)对HepG2细胞具有明显生长抑制作用，并能够激活caspase进而促进PARP切割，最终诱导细胞凋亡。本论文首次运用新靶点研究白芷的抗癌活性成分，并首次发现，除了香豆素之外，脂肪酸及其类似物也是白芷的抗癌活性成分。这为今后白芷的抗癌作用研究及未来新药开发提供了科学依据。关键词：白芷；蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2；脂肪酸AbstractAbstractRecently，peoplepaymuchattentiontoPTPstofindtargetedanti—cancerdrugswithhilghefficiency,lowtoxicityandstrongselectivity．Shp2，anon-receptorPTP，isfoundfirstlyasapromoting-cancerproteinwithphosphataseactivity．Thus，thediscoveryofShp2inhibitorsisveryimportantforthetreatmentoncancer．TraditionalChineseMedicine(TCM)hasbeenusedinChinaforcenturies．ThecomponentdiversityandstructurevarietymakeTCMbecomethehotspotinnewdrugdiscovery．Inthisthesis，wescreenapproximately2000crudeextractsfromChineseherbalplantslibrarywiththetargetofShp2．TheresultsshowedthatethylacetateextractofAngelicadahuricaCaninhibitetheactivityofShp2selectively．Onbasisofthisresult，wedidthefollowingresearchonEtOAcextractofA．dahurica．34compoundswereisolatedfromtheEtOAeextractofA．dahuricawithmanychromatographymethods，suchassilicagel，RP-18gel，Sephadexgel，HPLCandothers．ThestrcturesofthesecompoundswereidentifiedbasedonthedatafromNMRMSspectra,meltingpoint，andphysicalchemicalproperties．Amongtheseconstituents，compound19wasanewcompoundand15compoundswereisolatedfromA．dahuricaforthefirsttime．TheinhibitioneffectsofthesecompoundsonShp2enzymeweretestedusingPTP—Shp2selective-inhibitionmodel．Theresultssuggestedthatcompounds4，7，9，24，30and32in