第八章 酶非水相催化09.pptVIP

第八章 酶在非常规（非水相）介质中催化 大多数酶促反应是在水溶液中进行的。有关酶的理论也是基于酶在水溶液中的催化反应而建立起来的，许多有机溶剂也往往会使酶失活，因此，以往人们普遍认为酶只有在水溶液中才有催化活性，然而近20年来的许多研究表明，有些酶在适当的有机溶剂介质(含微量水的有机介质体系,一般含水量小于1 %)中也可起催化作用，其催化活性与水溶液中相当，甚至更高，并且具有下列显著特点： （1）提高非极性底物和产物的溶解度，从而提高反应速度。 （2）可催化水解反应的逆反应，而合成多肽、酯类等化合物。 （3）有利于反应后酶与产物的分离。 （4）解除或减少某些产物对酶的抑制作用。 （5）提高酶的稳定性。 酶工程除了如在固定化、定点突变、定向进化方面不断发展取得进步之外，近20年最大的突破就是在反应介质方面。 1984年美国克利巴诺夫Klibanov.A.M.在《科学》发表了一篇关于酶在有机介质中催化条件和特点的综述。他们在仅含微量水的有机介质(microaqueous media)中成功地酶促合成了酯、肽、手性醇等许多有机化合物。 ——无疑是对酶只能在水溶液中起作用,这一传统酶学思想的挑战。 酶非水相催化的几种类型 有机相反应介质的种类 a.水与水混溶有机溶剂，均匀混合物，单相。 b.水与水不相混溶的有机溶剂，二相系统。 c.酶粉悬浮在有机溶剂 d.酶与载体结合后，悬浮在溶剂中 e.酶溶解在含水的有机溶剂、表面活性剂的微乳液中 f.共价修饰酶溶于有机溶剂。 非水相反应介质酶促反应的优点 1）由于有机溶剂增加了疏水性底物的溶解度，增加了疏水性物质的转化效率。 2）在有机介质中，可发生水解反应的逆反应，如氨基酸合成肽 3）转酯反应是可行的 4）适用于一些反应产物在水中不稳定的反应，如酚氧化，在水中由于醌聚合，产率低；在氯仿中反应，效率高。 5）微生物污染低 6）有些酶在有机溶剂中稳定性比水中好。 非水相体系中的酶反应 有许多底物和产物（如甾体化合物、脂质类、碳氢化合物等），几乎不溶于水，这类物质的反应在水相系统有困难，如果把这些反应在非水相中进行，我们可使用更高的浓度，同时减少微生物污染的可能性。然而，通常酶存在于水环境中，但细胞膜中存在的酶则处于非水相中仍保持活性，但通常把酶放置于非水溶剂中会引起酶变性或失活，如何使酶在非水相仍保持活性？ 非水相体系中的酶反应 把潮湿（但几乎是脱水的）酶浸入有机溶剂中，这样酶被一薄层内相水所包围，酶仍处于水相环境中，底物仅通过一薄层水的扩散障碍。内相水(必需水)为保持酶的构象不被破坏，维持酶的催化活性所必需的最少水量。如果内相水不被破坏，酶就不会失活。 薄层内相水 S 底物 酶 P 产物 连续相 把维持酶活性的包裹在酶表面的吸附层水量称为必需水(essential water) 。 上述一薄层内相水也可以被适当的表面活性剂所加强，如十六烷基三甲基溴化铵CTAB，卵磷脂，形成“反胶束”包围酶分子，已开发出各种表活剂及助表活剂（如丁醇、已醇、辛醇）形成“反胶束”。 非水相体系中的酶反应Keq的变化 这样一个非水相系统，低水活度环境，将会引起反应表观平衡常数的极大变化。 如果一水解酶反应发生在低水环境，如1mol/l水浓度，和发生在正常环境（以水为基础的缓冲液为溶剂），对反应平衡常数（Keq）的影响，假设反应式如下： 二肽+水 氨基酸1(aa1)+氨基酸2（aa2） [aa1][aa2] Keq= [二肽][H2O] 水的正常浓度，纯水的水浓度为1000/180=55.5mol/l。 降低水浓度从55.5mol/