37.临床标本的微生物检验(一).pptVIP

临床标本的微生物学检验（一） 程曦 检验医学院 复习提问 血培养仪的测定原理？ 数码鉴定法基本原理是？ 主要内容 血液感染的微生物学检验 CNS感染的微生物学检验 皮肤及软组织感染的微生物学检验 要求 掌握血液、脑脊液、皮肤和软组织的微生物检验程序和检验方法（血液标本的增菌培养、增菌培养液的检查、分离培养与鉴定；余2标本的直接涂片检查、分离培养与鉴定）。 熟悉标本采集的注意事项。 了解常见病原体及其临床意义。 一. 血液感染的微生物学检验 菌血症 败血症 脓毒血症 有何区别？ 定义 菌血症：细菌由局部入血，在血中没繁殖，没产生毒素，没有全身中毒症状，血培养能找到细菌。 败血症：毒性强的细菌入血，在血中大量繁殖，并产生毒素，出现严重的全身中毒症状，血培养细菌阳性。 脓毒血症：化脓性细菌侵入血流后，在其中大量繁殖，并通过血流扩散至宿主体的其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。 正常人血液是无菌的，目前败血症一 词不常用，常用菌血症和脓毒血症，脓毒血症是指全身性炎症反应。 菌血症是指细菌侵入血循环，在血液 中可检测到细菌，有一过性的也有持续性的。 血液感染是一种危重的全身感染，提 供病原学的诊断极为重要。 常见血液感染病原菌 实验诊断 一般实验室检查： WBC增高（少数不变），出现中性粒细胞核左移或者中毒颗粒。血液C反应蛋白、前降钙素原升高。 血液标本的微生物学检查： 当怀疑病人有血液感染时进行标本采集。 病原菌的检验程序 1.标本采集 2.标本直接检查 (1)直接显微镜检查; (2)抗原检测; (3)核酸检测; 3.分离培养与鉴定 (1)培养基选择; (2)分离培养与鉴定; 4.抗体检测 常用ELISA、间接免疫荧光 技术等方法; 5.药物敏感性试验 检验程序 标本采集 血培养的指征 患者的体温、外周血白细胞计数，有明显的感染症状 1.发热（》38℃）或低温（《36℃） 2.寒战 3.白细胞增多（10×109/L，特别有“核左移”未成熟的或带状的白细胞增多） 4.粒细胞减少（成熟的多核白细胞1×109/L） 5.血小板减少 6.皮肤、粘膜出血 7.昏迷 8.多器官衰竭 9.血压降低 10.呼吸加快 采血部位及抽血量：一般抽取肘静脉血做血培养。采血量通常为培养液体积的1/10，成人一次5～10ml，儿童3～5ml，新生儿婴幼儿1～2ml。抽取的血液立即以无菌要求注入血培养瓶中，迅速送检。 WHO关于血培养的采血原则 疾病早期采集血液标本，因为疾病处于急性期或早期阶段时血液中的细菌数量较多。 发热时采集血液标本，因为高热时血液中的细菌数量较多。 抗菌药物应用前采集血液标本，同时采集3份血培养的阳性率将达到99%。 小孩血液中的细菌数量要比成人的多，因此，年龄越小，所需要的血液量也就相应的少。 儿童采血原则 儿童菌血症的血中细菌浓度为成人100-1000倍 婴幼儿采血总量不可超过婴幼儿全身血量2% 若幼儿血量较少可选择需氧瓶优先，因幼儿患厌氧菌血症机率较成人低 WHO不同年龄段所需采血量 年龄 两瓶中的采血量 小于2岁 2ml 2~5岁 8ml 6~10岁 12ml 大于10岁 20ml 采集血标本和接种时要严格无菌操作，避免杂菌污染。 根据菌血症和脓毒症所引起的疾病，还可采集不同部位的分泌物（痰液和脓液等）标本做涂片、染色和镜检或培养。 培养基选择 根据细菌种类和特殊要求 增菌培养基 普通培养基 选择培养基 特殊培养基 厌氧培养严格避免将气体注入培养瓶内 。 增菌培养基：含有聚茴香脑磺酸钠(SPS) 目前主张对病人已用过抗生素或磺胺类药物时，培养基每100ml中加入： 5mg对氨基苯甲酸以对抗磺胺类作用； 200u青霉素酶以对抗青霉素的作用； 1g硫酸镁以对抗其它抗生素(如链、四、土、新霉素及多粘菌素等)。 増菌培养基含有聚茴香脑磺酸钠(sps) 抗凝剂、抑制剂、中和溶菌酶和氨基糖苷类抗生素。 普通细菌培养：普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤； 布鲁菌用肝浸液； 甲型溶血链球菌、脑膜炎双球菌用胰胨肉汤； 厌氧菌用硫乙醇酸盐肉汤； 已用磺胺药物，加入对氨基苯甲酸；青霉素加入青霉素酶；其他加入硫酸镁。 一般临床分离标本的运送 不超过1h送交实验室； 4℃保存不能超过24h； 厌氧菌培养的临床标本，在厌氧的环境下，25 ℃，可保存20～24h； 脑脊液、生殖道、眼睛、内耳标本不进行冷藏。 分离培养与鉴定 分离培养与鉴定 增菌培养瓶中不同表现提示不同细菌生长： 增菌培养后应及时作如下检验： 涂片染色镜检 分离（需氧和厌氧）培养鉴定 直接药物敏感试验 盲目