酶联免疫吸附技术ppt课件.ppt

三、ELISA试剂盒的组成 6、酶反应终止液　　常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。 三、ELISA试剂盒的组成 7、参考标准品　　定量测定的ELISA试剂盒应含有制作标准曲线用的参考标准品，应包括覆盖可检测范围的4-5个浓度，一般均配入含蛋白保护剂及防腐剂的缓冲液中。 1、准备试剂： #取样 #购买相关的试剂盒 四、ELISA的基本操作 2、反应条件的选择 #包被Ag或Ab浓度 #酶标二抗浓度 #温度 #时间等 3、按照试剂盒说明书标准化操作 #加样 #保温 #洗涤 四、ELISA的基本操作 4、比色 酶标仪，通常指专用于测读ELISA结果吸光度的光度计。许多试剂公司配套供应酶标仪。酶标仪的主要性能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性等等。 四、ELISA的基本操作 行业处理客户投诉的技巧课件神经内科医疗质量及管理规范神经疾病病情观察及能力培养社区老年痴呆的全科诊疗身边的侵害和保护少先队礼仪文化知识培训 行业处理客户投诉的技巧课件神经内科医疗质量及管理规范神经疾病病情观察及能力培养社区老年痴呆的全科诊疗身边的侵害和保护少先队礼仪文化知识培训 行业处理客户投诉的技巧课件神经内科医疗质量及管理规范神经疾病病情观察及能力培养社区老年痴呆的全科诊疗身边的侵害和保护少先队礼仪文化知识培训 行业处理客户投诉的技巧课件神经内科医疗质量及管理规范神经疾病病情观察及能力培养社区老年痴呆的全科诊疗身边的侵害和保护少先队礼仪文化知识培训 行业处理客户投诉的技巧课件神经内科医疗质量及管理规范神经疾病病情观察及能力培养社区老年痴呆的全科诊疗身边的侵害和保护少先队礼仪文化知识培训 第12讲 酶联免疫吸附技术 第三章 免疫学检测技术 第一节 免疫学检测基本原理 第二节 免疫组织化学检测技术 第三节 免疫印迹技术 第四节 酶联免疫吸附检测技术 第五节 放射免疫检测技术 基本内容 一、ELISA的原理 二、ELISA的分类 三、ELISA试剂盒的组成 四、ELISA的基本操作 五、ELISA操作注意事项 六、ELISA的应用 七、课堂小结 八、作业 一、ELISA的原理 ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）是一种集中免疫学、生物化学及光学检测技术为一体的测定方法，把抗原或者抗体固定化后，加入酶标抗体或抗原，形成抗原抗体复合物，加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。 ELISA的优点： 操作过程简单易行 定量 快速 敏感 特异 实验设备简单 应用范围广 无同位素污染 一、ELISA的原理 1 2 3 4 是一种有机催化剂，无污染； 使底物供氢体由无色还原型水解变为有色氧化型； 很少量的酶即可导致大量的催化过程； 酶的活性高，敏感，高效。 “酶联”好在何处？ 一、ELISA的原理 对酶的要求： ?活性高，纯度高，催化转化率高； ?具有抗原抗体共价结合的基团，专一性强； ?标记后不影响酶活性及抗原、抗体反应性； ?产物易判定或测定； ?酶活性不受样品中其他成分的影响（抑制或激活）； ?无害； ?性质稳定； ?价廉； ?易得，来源丰富。 一、ELISA的原理 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的要素： （1）固相的抗原或抗体，即免疫吸附剂； （2）酶标记的抗原或抗体，称为结合物； （3）酶反应的底物。 只要有三要素，就可设计出各种不同类型的检测方法。 一、ELISA的原理 ELISA可以分为直接法、间接法、夹心法、竞争法、Dot-ELISA和BAS-ELISA等。 1、直接法： 直接法是指酶标抗原或抗体直接与包被在酶标板上的抗体或抗原结合形成酶标抗原—抗体复合物，加入酶反应底物，测定产物的吸光值，计算出包被在酶标上的抗体或抗原的量。 二、ELISA的分类 ELISA可以分为直接法、间接法、夹心法、竞争法、Dot-ELISA和BAS-ELISA等。 2、间接法： 将酶标记在二抗上，当抗体（一抗）和包被在酶标板的抗原结合形成复合后，再以酶标二抗和复合物结合，通过测定酶反应产物的颜色可以（间接）反应一抗和抗原的结合情况，进而计算出抗原或抗体的量。 二、ELISA的分类