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4、DNA的电泳 1、实验目的： 学习与掌握进行DNA电泳的方法，利用电泳检测DNA纯度、含量以及分子量，还可以分离不同大小DNA片段。 2、实验原理： 电泳概念及种类 影响电泳迁移的因素 电泳种类： 琼脂糖凝胶电泳： 分辨率稍低，适用于核酸电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳： 分辨率高，适用于较小分子核酸的电泳和 蛋白质电泳 DNA的大小 DNA的构象* 琼脂糖浓度* 缓冲液 分离不同大小DNA片段的合适琼脂糖凝胶浓度 缓冲液 TAE：Tris-乙酸盐缓冲液 TBE： Tris-硼酸盐缓冲液 TPE： Tris-磷酸盐缓冲液 实验操作（以1.2%的琼脂糖凝胶为例） 称取1.2克的Agarose琼脂糖，加入100ml 0.5×TBE，在微波炉上加热，使琼脂糖熔化。 等凝胶温度降至大约55℃以下时，加入100μl 的0.5 mg/ml溴化乙锭（EB）。 将移胶板放入胶室中，并将梳子垂直安插在移胶板上方，将凝胶倒入胶室中。 等凝胶完全凝固后(约30分钟)，将梳子轻轻拔出。 将凝胶体放入加有0.5×TBE电泳缓冲液的电泳槽中，并且使电泳缓冲液高出凝胶。 取1μl 6×上样缓冲液，和2μl 0.5×TBE缓冲液及3 μl DNA产物混匀后，加到凝胶孔中 取5μl l/HindIII marker*加样。 8. 盖好电泳槽盖子，选择适当的电泳电压（100V）以及 电泳方向，开始电泳。 9. 前面色素接近胶的先端，切断电流，停止电泳，打 开槽盖。 10. 取出样品，在紫外灯下观察，摄像。 DNA标准分子量——l DNA/HindIII Marker 23.1kb 9.4 6.6 4.4 2.3 2.0 0.56 * * 影响电泳迁移的主要因素 不同构像质粒 超螺旋DNA移动最快，双链开环DNA最慢 琼脂糖含（%） DNA片段的有效分离范围(kb) 0.3 5-60 0.5 1-30 0.6 1-20 0.7 0.8-12 1.0 0.5-10 1.2 0.4-6 1.5 0.2-4 2.0 0.1-3 *