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不同采收期青蒿黄酮和酚酸含量动态变化研究 　　[摘要] 目的 研究不同采收期青蒿中黄酮和酚酸类含量的动态变化规律，确定青蒿最佳采收期。 方法 通过正交试验设计，确定青蒿黄酮和酚酸类化合物的最佳提取条件，采用UV法，测定不同采收期青蒿中黄酮和酚酸类动态含量变化。 结果 不同采收期青蒿黄酮和酚酸类含量呈现规律性变化，即营养期初花期结实期盛花期。 结论 如以黄酮和酚酸类化合物作为青蒿药材质量的指标性成分，则青蒿药材最佳采收期应为营养期，该结果为青蒿药材采收期的确定和质量评价提供一定的科学依据。 　　[关键词] 青蒿；黄酮；酚酸；最佳采收期 　　[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）04（b）-0011-04 　　青蒿，属菊科植物黄花蒿（Artemisia annua L.）的干燥地上部分[1]，为一年生草本植物，全国均有分布，具有清虚热，除骨蒸，解暑热，截疟等多???药理活性。在临床上主要用于治疗疟疾、伤暑、潮热等症。化学成分主要包括：挥发油、香豆素、黄酮、萜类等，而以往对青蒿的研究大多集中在青蒿素及其衍生物的抗疟活性方面[2]，对其他成分研究较少。现代研究表明植物中黄酮与酚酸类化合物有保护心血管、抗肿瘤、抗病毒和抗人类免疫缺陷病毒等多种生物活性[3]。Shahidi等[4]和Bito等[5]分别在研究中提到：青蒿中酚酸类化合物具有抗菌、抗炎症和降低心脏病发病率等功效；而黄红英等[6] 研究青蒿中黄酮类化合物对猪油的氧化抑制，结果表明：青蒿中黄酮类化合物具有较高的抗氧化能力。目前，有关青蒿中黄酮及酚酸类化合物动态变化规律研究未见报道。因此，本研究采用乙醇超声提取技术和UV法对不同采收期青蒿中黄酮及酚酸类成分含量动态规律进行了研究，为青蒿最佳采收期的确定及青蒿规范化（GAP）种植提供科学依据。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　AX-105 十万分之一天平；BP121S万分之一天平（德国赛托利斯公司）；XW-80A微型漩涡混合仪（上海沪西仪器厂有限公司）；SB-1000YDTD 超声清洗槽（宁波新芝科技股份有限公司）；微量多功能读板机（infinite M200）；96孔板（Cos96ft-Corning 96 Flat Transparent）。 　　1.2 试药 　　青蒿样品：营养期（2011-6 -24、2011-7-9、2011-7-24）、初花期（2011-8-11、2011-8-20、2011-8-25、2011-9-1、2011-9-5）、盛花期（2011-9-11、2011-9-15、2011-9-20、2011-9-25）和结实期（2011-10-10）（江苏康缘药业股份有限公司青蒿种植基地），芦丁、没食子酸（≥98%）标准品（成都曼斯特生物科技有限公司）；AlCl3、NaOH、亚硝酸钠、无水碳酸钠、无水乙醇均为分析纯（天津市北方天医化学试剂厂）；福林-酚试剂（1mol/L）（天津市光复精细化工研究所）；Milli-Q水。 　　2 方法与结果 　　2.1 样品预处理 　　将不同采收期青蒿药材自然晾干，80℃下隔夜烘至恒重，粉碎，过100目筛。 　　2.2 总黄酮的含量测定方法 　　2.2.1 芦丁标准品溶液的配制 精密称取芦丁1.00 mg置于10 mL容量瓶中，用60%乙醇定容，即得100 μg/mL的芦丁标准溶液。 　　2.2.2 标准曲线的绘制[7] 取芦丁标准溶液0、0.04、0.08、0.10、0.14、0.16 mL，分别放入5 mL容量瓶中，均加入0.02 mL 5%亚硝酸钠，涡旋混匀，静置6 min，再加入0.02 mL 10%硝酸铝，涡旋混匀，静置6 min，再加入0.1 mL 4%氢氧化钠，用60%乙醇定容至刻度，涡旋混匀，静置15 min，在510 nm处测定吸光度（A），获得回归方程：A=0.005C-0.001（r=0.9990）。 　　2.2.3 样品测定[7] 精确量取待测样品溶液0.1 mL置于5 mL干燥容量瓶中，按“2.2.2”项下操作，同时以60%乙醇作空白，测定总黄酮含量。用下式计算药材中总黄酮的含量： 　　y=■×V×n×100% 　　式中，y为青蒿中总黄酮的百分含量（%）；A为吸光度；V为提取液体积（mL）；n为稀释倍数；M为药材粉末质量（g）。 　　2.3 Folin-ciocalteu比色法测定总酚酸含量方法 　　2.3.1 没食子酸标准溶液的配制 精密称取没食子酸1.03 mg至10 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即得103 μg/mL的没食子酸标准溶液。 　　2.3.2 标准曲线的绘制[8] 准确量取标准品溶液0、0.10、0.20、0.30、0.40、0