2016年艾滋病抗体检测技术课件.ppt

HIV－1P24 抗原检测的意义 1 HIV-1 感染窗口期、HIV 抗体不确定或HIV-1 阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断。 2 第四代HIV 检测试剂的阳性结果的辅助诊断。 3 监测病程进展或抗病毒治疗效果。 4 HIV 分离培养，病毒复制状况的监测。 检测方法及程序 1 试剂：抗体夹心ELISA 方法，应使用经国家药品监督管理局批准注册的试剂。 2 样品：血清、血浆或病毒培养上清液。 3 方法：筛选试验、确证试验（中和试验）、定量检测（标准曲线法） 确证试验过程 P24 抗原的中和试验，用于排除筛选试验的假阳性。 待检样品先与中和剂（P24 抗原的抗体）共同孵育，如果样品中存在P24 抗原，中和抗体将与之结合形成复合物，而不能与固相载体上的捕获抗体结合。 然后，用这样处理过的样品重复筛选实验的步骤，同时做一孔未中和的原始样品对照。 将中和与未中和孔的OD 值进行比较，如果中和孔的OD 值下降50 % 以上，认为样品中的P24 抗原是真正的阳性；如果中和孔没有出现OD 值的下降，认为P24 抗原的反应性可能是假阳性，需要做RNA 检测或随访做进一步确证。 HIV核酸检测 核酸检测的意义 婴儿早期诊断 疑难样本的辅助诊断 遗传变异：分子流行病学调查、人群HIV遗传变异趋势 病程监控和预后 指导病毒治疗及治疗效果， 定性检测：提取、扩增、电泳 定量检测：商品检测系统 RT-PCR bDNA NASBA 集合核酸定性检测：对高度怀疑感染人群且抗体阴性的样品进行集合核酸检测，及时发现窗口期感染者 HIV核酸检测---HIV感染产妇所生儿童早期诊断检测流程 3个月12个月 尽快在不同时间采集2份血样 12个月则按抗体检测流程，若抗体为阳性，不能凭此判断阳性，应尽快在不同时间采集2份血进行核酸检测 第六部分 质量控制 抗体检测的室内质量控制 试剂盒内部对照：用于判断每次实验的有效性 室内质控品：监控检测的重复性而设置，可以是商品或自行配制 绘制质控图 质控图的分析及失控处理 快速试剂质控 内对照有效 外部对照：可采用商品或自制的，不能使用ELISA的外部质控品，可用本室保留阳性样本。 下列情况需做质控：更换批号、更换检测人员、更换包装、更换厂家。 可能隐患：运输包装、内盒或试剂盒损伤、单包装内存在混杂物质，标签错误缺失模糊，泄露，不适宜的存放条件等等。 开展条件：确认实验室-中国CDC能力验证，筛查实验室或筛查点-省级或市级能力验证。 写病人编号 测试品种 测试号码 质控结果条带 病人结果条带 加样处 滴50ul血清或血浆 滴50ul全血 滴1滴缓冲液 阳性 阴性 无效 无效 3-15分钟 免疫层析试验（硒标法） 明胶颗粒凝集试验（PA）： PA的操作和结果判断 5 450/630nm下测定OD值 混匀，加盖， 37℃温育 洗板 3 加入底物 第二次特异性结合 4 加入终止液 1 加入样品 洗板 2 加入酶标记物 加盖，37℃温育 加盖，37℃温育 第一次特异性结合 二、酶联免疫分析（ELISA） （第三代、双抗原夹心、两步法） 可检测多种抗体 化学发光法 待测抗体 酶标记的抗原 发光底物 包被抗原 1.缩短窗口期：3-4天 2.灰区结果减少。 3.国际主要HIV检测试剂评估：无论是第四代（Abbott），还是第3代试剂（bio-rad），化学发光试剂都排第一，国产科美。 时间分辨免疫荧光法 第四代：可同时检测抗原及抗体 区分ELISA真阳性与假阳性，确诊出阳性样本 针对各种病毒蛋白的特异抗体 检测HIV-1和HIV-2 HIV抗体确证试验 Western Blot 免疫印迹法 全自动免疫印迹仪 各种诊断试剂特点（对缩短窗口期的效能） 新发感染（包括婴儿早期诊断）、耐药性研究 血液筛查、复核 血液筛查、复核 常规筛查 应急（职业暴露）、 急诊、VCT等 推荐用途 特异性较好 敏感性不足 35天 5周 明胶颗粒凝集试验(PA) 10天 15天 21天 25天 35天 不用于常规诊断 1周多 核酸检测 结果较难判断 假阳性率偏高 2周多 ELISA（进口第四代） 较为成熟 稳定性好 3周 ELISA（进口第三代） 特异性好(与WB一致) 敏感性不足 5周 金标法、硒标法 窗口期 特点 诊断试剂 普及 批间稳定性欠佳 3周多 ELISA（国产第三代） 快速试剂 偏远地区 用于急诊手术 用于高危