柿子叶中熊果酸超声波辅助提取工艺研究.docVIP

柿子叶中熊果酸超声波辅助提取工艺研究 　　【摘 要】为了充分利用柿子叶中的熊果酸，以柿子叶为原料，以熊果酸提取率为指标，采用超声波辅助提取了柿子叶中的熊果酸。分别研究了乙醇浓度、料液比、超声波时间和超声波温度对熊果酸提取率的影响。结果表明，熊果酸提取的最佳工艺条件是：乙醇浓度85%、料液比为1：12、超声波时间为25min、超声波温度为45℃，在最佳条件下，熊果酸提取率可达1.131%。 　　【关键词】柿子叶；超声波；熊果酸；提取工艺 　　柿叶为柿树科，柿树属植物柿的新鲜或干燥叶。柿叶味苦、性寒、无毒，治咳喘，肺气胀以及各种内出血。《滇南本草》记载“经霜叶敷臁疮”；《本草再新》记载“治咳嗽吐血，止咳生津”；《分类草药性》记载“治咳嗽气喘消肺气胀”。据报道，柿叶也有抗癌、抗菌、抗衰老、诱导凋亡[1-3]以及对特异性皮炎的作用。经科学研究柿子叶中含有黄酮类、鞣质、香豆精类化合物和树脂、还原糖、多糖及有机酸、胡萝卜素等多种物质，具有抗氧化、降血脂、通利血脉、清热解毒、生津止渴的作用[4-5]。此外，柿子叶尚含有五环三萜类化合物，其中熊果酸是其主要成分之一。 　　熊果酸（ U rso licA cid，UA ），又名乌索酸、乌苏酸，属A- 香树脂醇型五环三萜类化合物。纯净的熊果酸为白色针状晶体，易溶于二氧六环和吡啶，可溶于甲醇和乙醇，微溶于丙酮、苯、氯仿和乙醚。近年来，有关熊果酸的提取已经成为天然产物加工领域的研究热点之一。随着对熊果酸生物活性的深入研究，其在医药、食品、保健和化妆品等领域获得了广泛的应用[ 6 - 9 ] 。熊果酸在自然界分布很广，是多种天然产物的主要活性成分。目前，熊果酸主要从女贞子、山楂、夏枯草、车前草和苦丁茶等植物中提取[10] ，而很少有在柿子叶中提取的报道，本文对柿子叶中熊果酸的提取工艺进行研究，旨在为以后的研究工作提供参考。 　　一、材料与方法 　　（一）材料及仪器 　　干柿叶，采集于赣南医学院新校区（圆形红柿）洗净、干燥、粉碎后备用；熊果酸对照品，北京澳天茂森生物技术研究院；所用化学试剂中无水乙醇、高氯酸、香草醛、冰醋酸、乙酸乙酯等均为分析纯。 　　Lambda 35 UV/vis spectrometer紫外可见分光光度计、电子天平、SHB -3型循环水多用真空泵、DZF-6050型真空干燥箱、HHS- 2型电热恒温水浴锅、FW 177粉碎机和Lucky 数控超声波清洗机等。 　　（二）实验方法 　　（1）熊果酸的提取 　　取2 g柿子叶粉，加入适量的浸提液，搅拌，控制超声波温度为45℃，超声波处理25m in。处理后浸泡1 h，然后抽滤，取0. 2mL滤液移至试管中，减压蒸干。冷却后加0. 3 mL5% 香草醛- 冰醋酸和0. 8mL的高氯酸，60℃水浴加热15min，冷却至室温，用乙酸乙酯定容至5 mL，在549 nm波长处测吸光度。 　　（2）产品的紫外分析 　　精密量取0. 5mL柿子叶提取溶液，同时量取0. 5mL浓度为0. 2mg /mL的熊果酸标准溶液，分别置于具塞试管中，加热挥去溶剂后，加5% 香草醛- 冰醋酸0. 3 mL 和高氯酸0. 7 mL，然后在60℃水浴中加热15 min，取出冷却至室温。用乙酸乙酯定容至5mL，摇匀，用Cary 50紫外分光光度计进行紫外扫描分析，扫描熊果酸标准品和产品的最大吸收波。 　　（3）熊果酸标准曲线的绘制 　　精密称取熊果酸标准品10 mg，用无水乙醇定容于100mL容量瓶中，即得0. 1 mg /mL 的熊果酸标准溶液。分别精密吸取熊果酸标准溶液0.2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7、0. 8、0. 9 和1. 0 mL 置于具塞试管中，加热挥去溶剂后，加5% 香草醛- 冰醋酸0. 3 mL和高氯酸0. 8 mL，60℃水浴中加热15 min，取出冷却后移至5 mL聚酯试管中，用乙酸乙酯定容，摇匀后在549 nm处测定吸光度，同时以试剂空白作参比，以吸光度为纵坐标，熊果酸浓度为横坐标，绘制标准曲线，如图1所示。 　　从图1可以看出，R2 = 0. 9991，说明熊果酸浓度在2～ 10 ug /mL，具有良好的线性关系。 　　（4）熊果酸提取率的计算方法 　　式中：Y――熊果酸提取率，%；V――提取液体积，ml；X――熊果酸浓度，μg/ml；W――柿子叶样品质量，g。 　　二、结果与讨论 　　（一）产品的紫外分析 　　对标准品和产品进行紫外分析， 结果如图6和图7所示。 　　由图6 可知，熊果酸的最大吸收波长在549nm 附近。由图7可知柿子叶提取液在549 nm处出现明显的紫外吸收，由此可以判断出柿子叶中的提取物为熊果酸。 　　（二）单因素实验 　　（1）乙醇浓度对熊果酸提取率的影响 　　按上述试验方法，在超声波时间为30m