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不结球白菜同源四倍体种质创建及特性研究 　　摘要：利用优良二倍体不结球白菜华凤为试验材料，采用秋水仙素活体诱导其生长点，旨在创建同源四倍体种质。通过形态学比较、流式细胞仪测定遗传物质含量等方法鉴定了变异植株倍性，从中筛选获得了同源四倍体。在此基础上，选取3个优异同源四倍体自交系为研究对象，发现四倍体的营养品质提高，花期延长约10 d，结实率达到了应用的水平。研究结果表明，不结球白菜同源四倍体种质具有良好的应用前景。 中国论文网 /1/viewhtm　　关键词：不结球白菜；同源四倍体；秋水仙素；种质创新 　　中图分类号：S634.302 文献标志码：A 文章编号：1002―1302（2016）01―0173―03 　　不结球白菜别称青菜、小白菜，是我国广泛种植的蔬菜种类，如今正逐渐成为世界性蔬菜。不结球白菜营养丰富、适应性强、生长快速、易种植，特别适合作为稳定蔬菜价格的“杠杆”类蔬菜种植。因此选育耐热耐抽薹的不结球白菜新品种具有促进不结球白菜生产的意义，而多倍体独特的基因剂量效应促使多倍体在抗逆性上具有更强的优势，目前在不结球白菜新品种选育中已经有所应用，四倍体矮脚黄、热优2号等品种已经走向市场。四倍体不结球白菜通常具有植株个体增大、营养价值提高、抗逆性增强等优点，但是具有多倍体常见的育性下降、制种产量低等不足，如1个成熟的四倍体往往需要经过6～7代的驯化，才能基本达到生产应用的水平。因此，我们认为将四倍体作为新的种质资源，利用多倍体在基因突变、远缘杂交、固定杂种优势等方面的特点更加有效。本研究利用已有的技术手段，通过综合应用，将为不结球白菜异源四倍体种质创新构建高效的方法。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　试验材料为二倍体青梗菜品种华凤，由广州农鑫农业科技有限公司销售。四倍体矮脚黄由南京农业大学提供。试验于2012年9月20日至2014年5月26日在南京市蔬菜科学研究所横溪蔬菜科技园进行。 　　1.2四倍体诱导 　　2012年9月20日穴盘育苗200株，出苗后问苗、齐苗。待子叶展开，尚未破心之前用0.2%秋水仙素溶液点滴生长点，每次20μL，每天上、下午各处理1次，处理2 d。 　　1.3四倍体鉴定筛选方法 　　1.3.1形态学鉴定 形态学鉴定的原则是肉眼可见，主要包括叶形、叶色、花器官、角果、种子等。在形态学鉴定筛选过程中，将可疑株一律拔除。 　　1.3.2群体筛选 2013年9月25日，将一代自交种子按单株播种，调查群体的一致性。嵌合体在加倍过程中普遍存在，虽然通过形态学鉴定之后，部分被淘汰，但不一定完全。因此，在群体调查过程中，淘汰具有明显分离现象的群体。 　　1.3.3流式细胞仪倍性分析 流式细胞仪分析法可迅速测定细胞核内DNA的含量和细胞核的大小，是大范围鉴定倍性快速有效的方法。测定由南京农业大学协助完成，方法参照文献[4]。每个群体随机抽取5株进行测定，以二倍体为对照。 　　1.4四倍体留种 　　对鉴定为四倍体的诱变植株M0代，进行严格的单株蕾期人工授粉。2013年5月单株收种M1代并统计结实率，同年9月选择结实性高的单株播种，每株系自成小区。从叶柄宽、厚，叶色亮绿、束腰紧凑的株系中筛选优质单株严格自交留种，统计单株结实率（结实率=结籽数/角果数）。2013年9月重复上述步骤，收获M2代自交种。M1、M2代小区试验面积3 m×2 m，定植数量80棵，10月下旬定植，12月中下旬采收。 　　1.5四倍体营养品质调查 　　2013年11月5日选取标准棵菜进行测定，叶片和叶柄2个部位分开进行，3次重复，测定样品选取部位一致。营养品质测定的指标有可溶性蛋白质含量、可溶性糖含量、硝态氮含量、维生素C含量、粗纤维含量。考马斯亮蓝G-250染色法测蛋白质含量；蒽酮-硫酸比色法测定可溶性糖含量；水杨酸比色法测定硝态氮含量；液相色谱法测定维生素C含量；粗纤维含量测定参考康琪等的方法。数据使用Excel分析。 　　1.6四倍体育性调查 　　2014年春季观察四倍体花期情况并单株套袋自交留种，以四倍体矮脚黄为对照。 　　2结果与分析 　　2.1多重筛选的效果 　　受低温影响，200株处理植株中15%死亡，30%的植株受冻害影响严重，生长缓慢，营养生长积累不足，但对照生长正常。形态学鉴定过程中淘汰30%植株，主要是疑似嵌合体和畸形体。套袋自交之后，结籽单株44株，占总处理的22%，其中种子数量超过25粒的28株，占总处理的14%；种子数量超过50粒的16株，占总处理的8%；种子数量超过100粒的3株，占总处理的1.5%。将种子量达到50粒的播种育苗定植，其中无分离群体10个，挑选了其中3个群体进行抽样调查，进行形态学比较和流式细胞仪分析。 　　2.2二倍体、四倍体形态学比较 　　四倍体在不同生长时期形态上的