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大孔树脂分离纯化肉苁蓉总黄酮研究 　　[摘要]目的 利用吸附与解吸附的原理，通过静态吸附实验，得到AB-8型大孔吸附树脂对肉苁蓉中总黄酮具有良好的吸附与解吸能力。方法 通过动态吸附实验和正交试验得到较佳分离纯化工艺条件。结果 上样液浓度1.5 mg/ml，上样液流速3 ml/min，上样液pH=6为最佳吸附条件；80%的乙醇，以3 ml/min的流速洗脱，使用12倍柱床体积为最佳解吸附条件。结论 该工艺条件稳定性良好，切实可行，分离纯化前后总黄酮的质量分数由6.63%提高到72.35%，适合工业化生产。 中国论文网 /6/viewhtm　　[关键词]肉苁蓉；总黄酮；大孔树脂；分离纯化 　　[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）08（c）-0130-05 　　肉苁蓉（Cistanche）为列当科多年生草本寄生植物，具有性温，味甘苦，补肾、壮阳、润肠通便的作用，素有“沙漠人参”的美誉，具有极高的药用价值[1-2]。肉苁蓉中的化学成分主要包括苯乙醇苷类、黄酮类、环烯醚萜及其苷类、木脂素及其苷类、氨基酸类、糖类、挥发性成分及微量元素等，其中国内外学者对苯乙醇苷类化合物研究较多[3]。研究发现黄酮类化合物也有重要的生物活性，具有抗肿瘤、抗心血管疾病、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒、免疫调节等作用[4]，而目前对肉苁蓉中黄酮类化合物的提取、分离及性能研究相对较少[5-6]。 　　目前从肉苁蓉中提取活性物质已有研究，但从中提取并分离纯化黄酮还未见文献报道。分离纯化黄酮的方法有很多，如溶剂萃取法[6-9]、高效液相色谱法[10]、柱层析法[11]，由于大孔树脂理化性质稳定、不溶于酸碱、不受无机盐及低分子化合物的影响，具有良好的吸附性能、使用周期长、再生简便，被广泛应用于天然产物的分离纯化[12-14]。本实验用大孔树脂分离纯化肉苁蓉中总黄酮的条件进行工艺优化，确定最佳吸附树脂类型和影响因素，寻找一种吸附性大、易于解吸的树脂及最佳纯化工艺条件。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1试剂 　　乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙酸乙酯、石油醚（30～60℃）等（均为分析纯）试剂；芦丁对照品（生产批号100080-201408，纯度≥92.8%，购于中国食品药品检定研究院）；十二烷基硫酸钠（SDS）（化学纯）。 　　1.1.2仪器 　　UV-3600紫外可见红外光谱仪：岛津国际贸易（上海）有限公司；HL-2数显恒流泵：上海沪西分析仪器厂有限公司；LT电子天平：沈阳龙腾电子仪器有限公司；FW80微型高速万能试样粉碎机：北京中兴伟业仪器有限公司。 　　1.2方法 　　1.2.1供试剂的制备 　　取干燥肉苁蓉，粉碎，过40目筛，准确称量2.000 g，按照十二烷基硫酸钠（SDS）浓度1.50%，料液比1 g∶20 ml，提取温度80℃，提取时间1.0 h的条件下提取肉苁蓉中的总黄酮。将提取液过滤离心，然后取上层清液浓缩，将得到的浓缩液，依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，萃取后再次浓缩至膏状，然后用50%的乙醇溶液定容，备用。 　　1.2.2肉苁蓉中总黄酮的测定 　　精确称取干燥至恒重的芦丁标准品50 mg，用无水乙醇定容，摇匀，配制浓度为1 g/L的芦丁标准溶液。分别量取一定量的芦丁标准溶液即0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml，于10 ml容量瓶中，依次加入质量分数为5%的NaNO2溶液0.5 ml，加入后摇匀，并置于实验台静置6 min；再加入质量分数为10%的Al（NO3）3溶液0.5 ml，加入后再一次摇匀，并置于实验台静置6 min；再加入质量分数为4%的NaOH溶液4 ml，乙醇溶液定容，摇匀，置于实验台静置8～10 min，然后在最佳吸收波长510 nm处，测定不同质量浓度的芦丁标准溶液的吸光值，并绘制标准曲线。得回归方程y=16.643x-0.0081，r2=0.9995，结果表明芦丁的质量浓度在50～300 mg/L的范围内与吸光度具有良好的线性关系。 　　1.2.3大孔树脂的静态吸附实验 　　1.2.3.1树脂吸附实验中比吸附量、吸附率的测定 称取前期处理好的大孔树脂2.0 g，先加入5 ml黄酮提取液，再加入15 ml蒸馏水，摇床振荡24 h后，吸取1 ml上层清液，测定其中黄酮含量，按照以下公式计算： 　　。 式中，C1为静态吸附前黄酮提取液浓度（mg/ml）；C2为吸附饱和后的黄酮溶液浓度（mg/ml）；V1为加入黄酮液体积（ml）；m为干燥树脂质量（g）。 　　1.2.3.2树脂解吸实验中解吸率的测定 取“1.2.3.1”实验中已吸附饱和的8种树脂，置于锥形瓶中，加入相同体积的无水乙醇，摇床振荡24 h后，吸取1 ml上层