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降钙素原实验室检测及临床应用 　　降钙素元（PCT）是分子量13KD的一种糖蛋白，由甲状旁腺C细胞分泌，合成降钙素（CT），参与血钙调节。在1975年由Maya等发现其炎性因子特性, 到1993年,Assicot等发现了血清PCT水平的增高与全身感染性疾病有密切相关。PCT在感染性疾病的诊断和鉴别诊断、抗生素治疗启动和疗效观察、疾病转归和预后判断有着重要作用。 　　1 概述 　　1.1来源及生物学特性 PCT由 位 于 第 11 号 染 色 体( 11p15．4) 上的 Calc-1 基因编码，通过选择性剪接( 编码 1～4 外显子) 生成 Calc-1 mRNA，转录后在甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网翻译成 PCT 前体。裂解生成的 PCT 由 116 个氨基酸组成，相对分子质量为13 KD。它可被特殊的蛋白酶分解成 3 部分: C 末端21 个氨基酸多肽的抗钙素、位于中央的33 个氨基酸多肽的非成熟降钙素和 1个有 N末端的 57 个氨基酸多肽的氨基降钙素［1］。有研究显示，炎性反应过程中，PCT 由神经内分泌细胞以外的其他细胞产生。血浆中的 PCT 非常稳定，收集标本24 h 后 PCT 浓度在室温下大约下降 12% ，4 ℃ 时下降 6%。PCT 被特异性的蛋白酶降解，其在循环中的半衰期是 25～30 h。肾功能异常患者中 PCT 的清除半衰期无显著延长。 　　1.2 PCT与常用炎性标志物比较CRP是一种急性时相(期)蛋白，亦称C反应蛋白，是由肝细胞产生能结合肺炎球菌细胞壁糖蛋白，能监测疾病的发展情况。临床上常用检测CRP来评价感染所致炎性反应。以降钙素水平诊断全身细菌感染或败血症明显优于细菌培养。但PCT和细菌培养相比不能确定患者所感染细菌的种类，无法进行药敏试验，因此，在指导临床用药方面不如细菌培养。CRP、白细胞、血沉、IL-6等传统炎症判断指标，由于特异性不强、敏感性较低，应用价值有限，病原菌培养虽然是金标准，但耗时较长、培养率低。因此，PCT具有较高的敏感性及特异性,正逐步广泛用于临床。 　　2 降钙素原的实验室检测方法 　　降钙素原实验室检测的关键是通过基因工程技术，克隆表达并纯化PCT,然后制备单克隆或多克隆抗体[2]。 　　2.1 放射免疫学分析法利用人工合成PCT多抗特异地识别并连接合成氨基酸PCT。检测的是游离降钙素原、结合型降钙素原和降钙素基因相关肽前体的混合物，而不能区分上述3 种物质。其检测灵敏度为 4 ng/L，线性范围为 10-77 ng/L。该法检测耗时长（9~12 h），而且有放射性元素的污染，使用受到限制。 　　2.2 双抗体夹心法：使用 2 个单克隆体，分别结合到降钙素原分子的 2 个部位，这样可排除交叉反应。根据标记物和作用底物的不同，可采用ELISA、免疫荧光法、化学发光法和电化学发光法。双抗体夹心法运用双单克隆抗体,抗钙素抗体作为捕获抗体直接结合PCT96-106氨基酸残基即未成熟CT:CCP-1部分,CT抗体作为示踪抗体直接结合PCT70-76氨基酸残基未成熟CT分子,两个抗体与PCT相结合,形成双杭夹心复合物,通过测量光子（吸光度）数量, 信号的强度与标本中PCT浓度成正比,与同条件下测定标准品绘成的标准曲线对比可计算出样本中PCT含量，可计算出标记物的含量。双抗体夹心法灵敏度高、特异性强、操作简便,最低检测浓度值为0.1ng/ml,可在2h内发出报告[3~5]。 　　2.3 胶体金检测金标胶体方法通过观察颜色判断,易观察、不需要检测仪器,快速,操作简便等特点,但价格较贵。 　　2.4 透射免疫浊度法利用样本中PCT与试剂的PCT单抗发生抗原-抗体反应,标本中PCT浓度与浊度呈线性正比。在600nm波长处用生化分析仪测定吸光度值,其值与PCT含量成正比。该法适用于全自动生化分析仪,操作简便、快速,可进行大批量检测。 　　2.5凝胶层析法及高效液相色谱分析法目前凝胶层析法及高效液相色谱分析法已有研究开发,因费时且不易自动化很少使用。 　　3降钙素原的临床应用 　　3.1在感染性疾病诊断和鉴别诊断中的应用当严重细菌、真菌、寄生虫感染、严重休克、全身性炎症反应综合征（SIRS）和多器官功能紊乱综合征（MODS）以及脓毒症时它在血浆中的水平升高。自身免疫、过敏和病毒感染、局部有限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症时PCT不会升高。 　　3.2 在病情发展和疾病预后的作用随着病情严重程度增加，血浆PCT浓度明显增高，PCT水平下降表明炎性反应的降低及感染灶的清除，提示预后良好。 　　3.3 在严重创伤、手术患者并发症的监测作用术后患者血清 PCT一般不升高或轻度升高，无细菌污染或内毒素释放的轻度创伤、小手术，血清 PCT 值常在正常范围之内。大手术如胃、食管切除术后 2 ～3 d，血