第二章 微生物的纯培养和显微技术赵飞骏.pptxVIP

引 言;第一节 微生物的分离和纯培养;灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方法，包括杀灭芽胞（休眠体）和繁殖体，病原微生物和非病原微生物。;桌上型电热压力蒸气灭菌锅 ;棉花塞;2、接种操作： 无菌操作：防止微生物进入人体或其它物品的操作技术，如外科手术、微生物实验。;接种针（环）：用镍铬合金制备;图2－1 无菌操作转接培养物;;二、用固体培养基获得纯培养;图2-3 各种微生物形成的菌落特征;菌落;固体培养基：;1、稀释倒平板法(pour plate method)：;2、涂布平板法(spread plate method)：;图2-4 稀释后用平板分离细菌单菌落;与稀释倒平板法比较：;3、平板划线法(streak plate method)：常用;分区划线法（左）及菌落分布示意图（右） ;平板划线法;4、稀释摇管法( shake tube method)：;用稀释摇管法在琼脂柱中形成的菌落;三、用液体培养基分离纯培养;四、单细胞（单孢子）分离：待分离微生物不占优势时;五、选择培养;* 筛选蛋白酶产生菌：;2、富集培养;e.g：富集法分离土壤中能降解对羟基苯甲酸的微生物;挑取一部分单个菌落;图2-6利用富集培养技术从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物;六、微生物的保藏技术;1、传代培养保藏：一般需冷藏;2、冷冻保藏;* 介质的影响：;* 保藏温度越低，保藏效果越好;3、干燥保藏法;* 冷冻真空干燥保藏：是目前使用最普遍、最重要的微生物保藏方法。;其它保藏方法：纸片保藏、薄膜保藏、寄主 保藏等;第二节 显微镜和显微技术;1、普通光学显微镜：由目镜和物镜两组透镜放大成像，故常被称为复式显微镜。;镜筒;* 分辨率是决定显微镜观察效果的最重要指标; Tab.2-1 不同显微镜物镜的特性比较 p22;* 肉眼的正常分辨能力一般为0.25mm左右，因此光学显微镜有效的最高总放大倍数只能达到1000~1500倍（250/0.18=1388.8);2、暗视野显微镜;图 2-8 明视野（左）与暗视野（右）的照明示意图;A、光线通过暗室窗子射出时，可看见悬浮在空气中的尘粒。暗视野同理。;;3、相差显微镜：;4、荧光显微镜：;荧光检测;5、透射电子显微镜：transmission electron microscope,TEM;图 2-9 显微镜的分辩率比较;透射电子显微镜与光学显微镜的差异：;透射电子显微镜;6???扫描电子显微镜（scanning electron microscope,SEM）：;电镜照片;二、显微观察样品的制备;（1）活体观察：; 压片法观察细菌动力 ;* 观察：可采取明视野、暗视野或相差显微镜对微生物活体直接观察;标本制作：涂片 固定 ;细菌染色法;2. 电子显微镜的制样;第三节 显微镜下的微生物;1、细菌的形态和排列;图2-14 细菌的三种基本形态。左为模式图，右为照片;形态与结构;;*其它形态的细菌：;*有些细菌在不同的生长阶段具有不同的形态 如放线菌。 放线菌是生产抗生素的重要微生物，多由分枝发达的菌丝组成。而根据菌丝的形态和功能又可分为营养菌丝、气生菌丝和孢子丝三种，其中孢子丝的形态特征是放线菌的重要鉴定指标。 ;图2-15 链霉菌的不同特征孢子丝形态;图 2-16 具有不同孢子丝形态的链霉菌照片（Streptomyces spp） ;2、古生菌(Archaea)：与细菌具有类似的个体形态，多生活在一些生存条件十分恶劣的极端环境中（如高温、高盐、高酸等）。;* 隐蔽热网菌的最适温度为105℃， (P32,Fig2-20)而从太平洋海底“黑烟囱”火山口附近分离的“121株”，是迄今所发现的最耐热的生物之一。(P31,Fig2-17);隐蔽热网菌;火山热原体;图2-25 不同细菌大小的比较;纳米细菌（细胞直径仅为约50nm）——最小的细菌;二、真菌;1、霉菌;霉菌菌丝; 图 2-23 a）霉菌菌丝示意图 A 无隔多核菌丝、B 有隔单核菌丝、 C 有隔多核菌丝； b）产黄青霉（Pencillium chrysogenum）、 c）黄曲霉（Aspergillus flavus）的分生孢子（conidiospores）形态电镜照片。;营养菌丝：在固体培养基上，部分菌丝伸入培养基内吸收养料，称营养菌丝；另一部分则向空中生长，称为气生菌丝。有的气生菌丝发育到一定阶段，分化成繁殖菌丝。;真菌的菌丝;图21-2 孢子的形态结构;* 应用：;2、酵母菌;;与人类关系;三、藻类;图2－25 光学显微镜下的绿藻形态; 绿藻(gree