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胶体金免疫标记技术检测HCG
胶体金免疫标记技术检测HCG;金标记免疫技术;斑点金免疫渗滤试验;斑点金免疫渗滤试验检测尿β-HCG
【原理】
选取二株抗HCG不同决定簇的抗体,其中一个用胶体金标记,另一抗体吸附NC膜表面形成斑点,膜下面垫有吸水材料。标本经滤膜板除杂质后,标本液经NC膜渗滤,膜上抗体捕获HCG,形成免疫复合物。之后加入抗HCG免疫金结合物形成特异性双抗体夹心物。此时胶体免疫金颜色的深浅与标本中HCG量成正相关。;【操作步骤】
1、免疫渗滤装置的制备:
在硝酸纤维素膜正中央滴加5ul HCG抗体A
↓室温静置10min
在硝酸纤维素膜上滴加封闭液2滴
↓37℃孵育并烘干45min
取出后搭建渗滤装置
(由下往上:塑料粉色底壳+吸水垫+硝酸纤维素膜+塑料黑色壳盖)
裁剪吸水垫:
裁剪宽2cm,长40cm的吸水纸(约吸水纸上3段虚线的长短),沿虚线折叠成长3.5cm,宽2cm,厚0.5mm的吸水垫。
;【临床意义】
1.此实验可设置参照标准孔进行半定量测定。正常未妊娠妇女尿中不含HCG,或其含量上限 50mU/m1。HCG由胎盘滋养层细胞分泌,为分子量47000的糖蛋白。孕妇妊娠1周后,尿中HCG迅速升高,呈阳性反应。停经后8周左右,尿中激素含量达到最高,以后逐渐减低,直至转为阴性。
2.绒毛膜上皮癌、水泡状胎块和睾丸畸胎瘤病人的尿中,HCG均可呈强阳性反应。
【注意事项】
1、胶体免疫金结合物加入时,手持滴瓶应垂直向下,液滴内不含气泡。
2、特异性抗体(一抗)或抗原、待检标本和金标抗体的用量事先都必须应用方阵法确定最适用量。
3、盒底充填的垫料吸水性要强,否则影响结果。;免疫层析层析试验 ;;;;
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