2011病理切片染色程序ppt课件.pptVIP

第四节 病理切片染色程序蔡俊杰 南方醫科大學基礎醫學院病理系南方醫院病理科;一、 切片的普通染色 普通染色又称常规染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色或蘇木素伊紅染色。它是病理技术中最常用的一种方法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法特殊染色或免疫組織化學染色或分子病理技術 ，以达到准确，完整的病理诊断。 1、染色目的 病理学的所有切片，都必须通过一种以上的染料，通过各种不同的方法，将切片中各种不同的物质，在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。例如，HE染色，好质量的切片可以清晰地显示出许多不同的结构，细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，软骨着蓝色等。 ;2、染色的作用 （1）．化学作用：所有的染色液中，可把它们分为两种类型，一种为酸性，另一种为碱性。酸性染料中有染色作用的为阴离子；碱性染料中有染色作用的为阳离子，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。在染色时，细胞核中的酸性物质与苏木素染液中的阳离子发生作用，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离子发生作用，由于反应的部位不同，结果着色有异。 ;（2）．物理作用：在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此时，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而着色。由于各种组织有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜色来。 一般来说，染色的学说还有许多，但说服力强的仅有上述两种。但不管怎么样解释，实际上完成的每一种染色，都与上述两种学说分不开，它们的作用是相辅相成，同时存在的。 ; 3、苏木素 伊红染色法（HE法） ⑴切片浸入二甲苯中5-10min； ⑵切片浸入二甲苯中5-10min； ⑶100%酒精 30sec. ⑷100%酒精 30sec. ⑸95%酒精 30sec. ⑹95%酒精 30sec. ⑺90%酒精 30sec. ⑻80%酒精 30sec. ⑼自来水洗 30sec. ;?⑽浸入苏木素染液浸染10-15min。 ⑾自来水洗30second-1min。 ⑿1%盐酸酒精分化30second。 ⒀流水冲洗15min以上。 ⒁1%伊红酒精染3-5min。 ⒂90%或95%酒精分化30sec。 ⒃95%酒精30sec. ⒄95%酒精30sec. ⒅95%酒精30sec . ;⒆100%酒精 30sec. ⒇100%酒精 30sec. (21)碳酸二甲苯 30sec. (22)二甲苯 30sec. (23)二甲苯 30sec. (24)二甲苯 30sec. ;中性树胶封固。 结果：细胞核被染成深蓝黑色；细胞浆被染成粉红色；软骨及钙盐被染成蓝色；胶原纤维染成淡粉红色，嗜酸性细胞及嗜酸性颗粒呈鲜红色；弹力纤维呈淡粉红色；某些蛋白性物呈粉红色等。 ;4、染色时的注意事项： (1)、切片用二甲苯脱腊，应视不同的季节有不同的脱蜡时间，在夏天，室温较高，脱蜡较迅速，往往在2-3min就可脱蜡干净，二在冬季，时间应相对延长。 (2)、切片在进入二甲苯前，可用电吹风吹切片，使切片上的蜡处于熔解状态，这样脱蜡较迅速，尤其是冬天，此法更可行。 切片上的蜡一定要清除彻底干净，否则将影响染色，造成切片染色不均的现象。 ;(3)、切片进行无水化处理，这一步骤，一是可增加切片的附帖，二是可延长苏木素的使用寿命。切片用二甲苯脱蜡后，不能直接水洗，因二甲苯不溶于水，必须经过酒精，酒精可溶解二甲苯，又能与水混合，按照以前教科书的要求，切片在整个染色过程中，都不要让其干燥。经过多年的实践及经验，笔者认为，切片用酒精将二甲苯彻底消除后，在进入苏木素染液前，可用电吹风吹干，这一步对于切片没有充分的烤片时间，对于血块等的切片来说，尤为重要，切片经此步骤，增加了附贴的牢固性，减少切片在染色过程中脱离载片的机会，保证了染色的成功率。另者，切片进入苏木素染液全无水，可保证了苏木素染液的浓度和PH值，延长其使用寿命。以往切片进入苏木素染液前，都须经水洗，每次染色，都带入不少的水分，稀释了苏木素染液的浓度，改变了它的PH值，使染液寿命缩短。 ; (4)、苏木素染液中的最佳染色时间，确切地回答还是比较困难的，因为各种组织都有不同的染色时间，核的染色时间从30sec至15min不等。 (5)、苏木素染液有多种，常规应用的通常为明矾苏木素，明矾苏木素又有Harris苏木素，Mayer’s苏木素，和Ehrish苏木素等。 ; （6）、酸酒精分化切片，浓度有0.25%,0.5%和1%根据各人的情况而使用。这一步主要是将过染的颜色及不该染的染色去除掉，这一步要掌握得当，必须靠经验，核的染色清楚与否靠分化这一招，分化过度，核染色淡，分化不足，核染色质一团，分不清。初学者应于显微镜下