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2018-07-25 发布于贵州
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分子克隆技术讲解ppt课件

植保生物技术讲座05;克隆载体;pBR322;pBR322;pBR322是4362bp的环状双链DNA载体，有2个抗药性基因（四环素和氨苄青霉素），一个复制起始点和多个用于克隆的限制酶切点。当缺失抗药性基因的大肠杆菌被pBR322成功地转化时，它便从该质粒获得了抗生素抗性。两个抗生素基因中均含供插入外源DNA用的不同的单一酶切位点。一般只选一个抗生素基因作为插入外源DNA之用。外源DNA插入后该抗生素抗性失活。另一抗生素抗性基因则作为转化细菌后筛选阳性克隆之用。;四个重要位点;pUC系列质粒;pUC19;pUC18 和 pUC19;pUC18和 pUC19;pUC19图;pBluescript II系列;pBluescript?II载体上的重要位点;pBluescript II KS/SK;pBluescript SK;M13mp18 和 M13mp19 载体;M13mp18/19结构图;多克隆位点;Lambda噬菌体;Lambda噬菌体唯一切点;Lambda噬菌体载体;cos质粒;cos质粒载体;一个典型的质粒克隆技术涉及5步;克隆示意图;克隆示意图;1. 用限制性酶消化 DNA 样品;粘性??端;2.用限制性内切酶消化质粒DNA ;3.连接样品DNA和质粒DNA的消化产物;冷循环器;4.用连接产物转化大肠杆菌感受态细胞;用氯化钙化学转化;用氯化钙化学转化;电激转化;一个电激转化程序;5. 细菌在加有Amp+X-Gal的培养基上生长以进行筛选;灭菌器;加IPTG和X-GAL;倒平板;划线;筛选结果;重组体筛选;筛选结果模式图;蓝菌落;蓝菌落;蓝白菌落;蓝白菌落;蓝白菌落;乳糖和诱导物IPTG的化学结构 ;X-gal;X-gal水解;实验室;实验室;移液枪;;吸取;使用移液枪;使用移液枪;电泳仪