分子荧光分析法实验讲解ppt课件.pptVIP

《仪器分析实验》实验4 分子荧光光谱法测定维生素B2的含量;一、分子荧光分析法简介;1.1 荧光的产生;发生激发 态反应;1.2 荧光光谱;激发光谱;1.3 荧光定量;1.4 荧光仪的基本构造;1.5 分子荧光分析法的应用简介;二、维生素B2含量的荧光法测定;2.2 实验流程;1.开机： 打开RF-5301荧光分光光度计的电源开关，打印机开关，开启电脑。预热仪器20分钟。 2. 配制系列维生素Ｂ２标准溶液： 取5个干净的50ml容量瓶，分别加入1.0, 2.0, 3.0, 4.0 , 5.0ml浓度为10.0μg/ml的维生素Ｂ２标准溶液用水稀释至刻度，摇匀。 3.仪器自检： 预热仪器20分钟后，双击电脑桌面上“RF-530XPC”图标，仪器在计算机的引导下开始自检，约3分钟完毕，此时仪器操作软件打开。 若此时软件为“光谱测定”模式，则点击“Acquire Mode”主菜单，在下拉菜单中选择“Quantitative”，此时软件转为“定量测定”界面模式。;4. 参数设定： “定量测定”界面模式下，点击“Configure”主菜单，在下拉菜单中选择“Parameters”菜单，则会自动弹出“Quantitative　 Parameters”窗口，在此窗口中，需要设置以下五个参数： 在“EX Wavelength”中填　270， 在“EM Wavelength”中填　525， 在“Slit Width[nm] EX”中填　10， 在“Slit Width[nm] EM”中填　10， 在“Sensitivity: High Low” 中选 Low，其他参数选默认值，不要调整它们，参数设置好后，按“OK” 此时软件自动回到“定量测定”界面模式。此时仪器参数设置完毕。;5.空白溶液测试： 设置好仪器的工作条件后，把装有去离子水的样品池置于试样架内，在荧光光路上插入ＵＶ－35滤光片，合上样品室盖子，在计算机屏幕上点击“AUTO ZERO”，观察屏幕右下脚的基线值接近零时，再点击“READ”读数，得空白溶液数值。 6.系列维生素Ｂ２标准溶液的测试： 把各标准样品按从稀到浓的顺序置于试样架内，和空白溶液测试方法相同，分别测定不同浓度标准溶液的相对荧光强度。 7. 未知试样的测定： 将已配制处理好的未知试样装入样品池置于试样架内，用测定标准溶液相同的条件，测其相对荧光强度。 8. 关机： 先关计算机，???关仪器，打印机；清洗样品池，容量瓶等玻璃仪器，整理好仪器。;2.3 注意事项：;2.4 数据处理