免疫分析法体内药物分析ppt课件药物分析研究生复试用重点已标红.pptVIP

考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分 （Immunoassay，IA） 第七章 免疫分析法 免疫分析法是指以特异性抗原-抗体反应为基础的分析方法。 常用于蛋白质、多肽、酶等大分子量物质的测定，也可用于小分子量物质测定。如糖尿病人血浆中的胰岛素含量。 免疫分析法 概述 放射免疫分析 酶免疫分析 第一节 概述 基本原理 基本条件 方法分类 竞争抑制原理 ? 基 本 原 理 抗原 （ Antigen） 抗体 （Antibody) 竞争结合 反应 标记抗原 当反应体系中存在着一定限量的特异抗体时，体系中的标记抗原（Ag※）和未标记抗原（Ag）与特异抗体（Ab）发生竞争结合。 ? 基 本 原 理 定 量 基 础 随着加入的Ag的量（S0）的增加，便有不同的对应F※和B※的信号值，建立S0量（浓度）与响应值（F※和B※或B※/F※或B※/T ）之间的函数关系，即标准曲线。 F B F* B* ? 基 本 原 理 标准竞争抑制曲线的制备 空白生物基质6～8份 竞争结合达平衡 等量的抗体Ab和标记药物S※ 不同量的非标记药物S0 （药物标准品S0) 用适当方法测定F※或B※ 以S0为横坐标，响应值为纵坐标作图 ? 基 本 原 理 标准竞争抑制曲线 一般坐标 一般坐标 半对数坐标 对数坐标 ? 基 本 原 理 抗原抗体反应必须满足的条件 Ag※与Ag（药物）必须是相同的生物活性 物质 所加入Ag※与Ab的量应是固定的 Ag※与Ag的量之和应大于Ab的结合位点 Ag※、Ag及Ab须处于同一反应体系中 ? 基 本 原 理 抗原抗体反应的基本特点 ? 特异性（专一性） 一种抗原分子只能与由他刺激产生的抗体发生特异性结合反应。易受到结构近似的化合物的干扰（交叉免疫，cross reaction) ? 可逆性 抗原抗体结合反应相对稳定，但可逆，改变条件，可使结合物解离，结构、性质和活性不变；可用来纯化抗原或抗体。 ? 最适比例性（可饱和性） 抗原抗体反应具有一定的量比关系。只有当抗体抗原两者的分子比例合适时，才能发生最强的结合反应 ? 基 本 原 理 总 结 基 本 原 理 基于抗体和药物（抗原）结合时具有的专一性、可逆性和最适比例性，利用未标记抗原（被测药物）同标记抗原（标记药物）之间竞争抗体结合原理，建立药物浓度和响应值之间的函数关系，用于生物样品中的药物分析。 第一节 概述 基本原理 基本条件 方法分类 ? 基 本 条 件 三 种 基 本 试 剂 ? 标记抗原（标记药物） 提供可检测的信号（响应值） ? 未标记抗原（药物） 制备标准曲线时——指药物标准品或对照品 测定时——指被测药物 （标准抗原） ? 特异抗体 标记抗原（药物）和未标记抗原（药物）竞 争结合的蛋白 ? 基 本 条 件 抗 体 的 制 备 半抗原（Hapten) 人工抗原 免疫接种动物 免 疫 原 抗 血 清 只能与特异抗体作用但不引起机体免疫应答的物质 小分子半抗原与大分子载体结合后形成的全抗原，具免疫原性 与大分子载体结合，动物血清蛋白最常用 能刺激机体引起体液及细胞免疫反应的物质 加入福氏完全佐剂或水剂 家兔、羊、豚鼠 含抗体的血清，一般不将抗体分离 注射 采血 第一节 概述 基本原理 基本条件 方法分类 ? 方 法 分 类 按是否加入分离剂 ? 均相免疫分析（Homogeneous Immunoassay） 在某些免疫反应中，当抗原－抗体反应达到平衡后，反应液中结合的标记药物与游离的标记药物中，有一种不产生信号或信号消失，因此无需将反应液分作两相，即可在均相溶液中进行测定，故称为均相免疫分析。 ? 非均相免疫分析（Heterogeneous Immunoassay） 在某些免疫反应中，当抗原－抗体反应达到平衡后，只有在反应液中加入分离剂，将游离标记药物和结合标记药物分开之后，才能测出各自部分的标记药物浓度，否则测定的是两者的总浓度。由于这种信号的测定需将反应液分成液－固两相后，才能分别测定，故称为非均相免疫分析。 ? 方 法 分 类 按标记物的种类 方法名称 标记物 备注 放射免疫分析（RIA） 放射性同位素 非均相免疫 酶免疫分析（EIA） 酶 非均相免疫 均相免疫 荧光免疫分析*（FIA） 荧光物质或潜在荧光物质 非均相免疫 均相免疫 化学发光免疫分析（CLIA）