蒙古沙冬青干旱诱导表达smart cdna文库的构建及序列分析-construction and sequence analysis of smart cdna library of ammopiptanthus mongolicus induced by drought.docxVIP

酶(superoxidedimutase，SOD)和l过轼化M酶(catalase，CAT)等保护酶系和抗坏血酸等抗氧化物质，从而有效地消除活性轼，使细胞免受伤害，提高J_:抗早性[SM10因此，从强抗逆植物中克隆SOD和CAT等保护酶系的编码基因，并将其应用于植物抗旱基因工程成为多年来人们关注的研究课题。④水通道蛋白基因干旱胁边下的水分供应对于维持细胞膨压及其正常代谢起关键作用。植物体内的水通道蛋白可以形成选择性的水运输通道，允许水分子自由出入，但将离子或其它有机物质拒之门外，从而提高植物的抗旱性I飞研究发现，在干旱胁迫下，拟南芥7.1通道蛋白基因表达11I增加t叫，说明干旱能诱导水通道蛋白基因表达，从而改变膜的水分通透性，使水分更容易透过细胞质膜进入细胞，维持胞内适宜的水分环挠。(2)抗旱调节基因其表达产物主要包括转录因子、蛋白撤酶和l参与磷脂代谢的酶类。①转录因子基因转录因子(TranscriptionFactor，TF)也称为反式作用因子，是能够与真核基因启动子区域中的顺式作用元件发生特异性互作，从而增强或阻遇基困转录的DNA结合蛋白。转录因子可分为组成型表达t川s归剖创]和诱导型表达两决类(1恃川伽关转录困子基因主要包括MYB类转录因子、含M直性螺旋-环-螺旋(bHLH)和亮氨酸拉链的MYC类转录因子(18)、含碱性区域和亮氨酸拉链的bZIP类转录因于(19)、悴指类转录因子和具有AP2结构域的DREB(DRE-bindingprotein)/CBF(C-repeatbindingfactor)类转录因子I甜l寄:编码基因，其中有些基因可以提高转基因植物的抗旱和抗低温能力(21-22)。②蛋白激酶和磷脂代谢酶类基因蛋白质的可逆磷酸化作用是植物细胞信号转导的重要环节闹，是植物响应逆境胁迫的普遍生化调节机Hltl，而在此过程中蛋白激酶起重要的催化作用。磷脂酶则与细胞内磷酸肌醉类第二信使物质的生成有关，因此在干早胁迫信号传递中发挥功能。目前发现，类受体蛋白激酶、核糖休蛋白激酶、转录调控蛋白激酶手n磷脂酶C等基因在拟南芥(Arabidopsisthaliana)对干早等逆境胁迫的响应及其信号传递中起重要作用(2倒。(3)植物干阜胁迫信号转导途径研究发现，当植物感受到干早胁迫信号时，通常先是抗早调节基因被迅速诱导表达，然后通过一系列复杂的信号转导途径将胁迫信号向下游传递，最终激活抗旱功能基囚的表达，使植物对逆境胁边产生适应或抗性。这一过程常涉及到逆境信号的跨眼转导和胞内信使分子的产生及蛋白质的可逆磷酸化级联反应。与干旱胁迫信号转导有关的第二信使主要包括IP3(inositol1人5-triphosphate)、ROS丰和I口和ICωa2+等等(2甜阳@忖叫-2甜斗8剖划]主耍的信号传感蛋臼矛和和[1蛋白撤酶有CBLs(ωc剖alcαmeu町门rrinB-lik巳prot忧em略s吵时)及CIPKs(CBL-interactingproteinkinases)、MAPKs(mitogen-activatedproteinkinases)罪CDPKs(Ca2+-dependentproteinkinases)(州等。植物激素ABA(abscisicacid)作为内源信号分子在植物响应干旱胁迫的信号途径中扮演着重要角色I仲圳。目前认为，在干旱胁j.ê_信号传递中至少存在两条依赖ABA的途径，受其调节的基因启动子中常含有ABRE(ABA-responsiveelements)应答元件。此外，还存在两条不依赖ABA的信号传递途径，受;1t调节的基因应答元件是DRE(Dehydrateresponseelemenl)/CRT(C-I叩eat)(33)。这些信号途径之间以及它们与低温和l盐胁迫等信号途径之间存在一定的交叉{341，从而构成了植物应答和抵御逆境胁边的整体信号转导网络。1.2全长cDNA文库技术及其应用cDNA文库是指某生物在某发育时期所转录的全部mRNA经反转录所形成的cDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合[划。cDNA文库根据构建方法及文库的特征主要分为普通cDNA文库、差减cDNA文P-f，:(substractivecDNAIibrary)、均一化cDNA文库(normalizedcDNAlibra圳、全长cDNA文库(full-IengthcDNAlibrary)和全长差减/均一化cDNA文库(FullandsubtractivecDNAlibrary/HomogenizatedcDNAlibrary)等几种刷。其中全长cDNA文库的构建可以高效率、大规模获得基因的完整ORF，并且大多数序列还包括5和3端的非编码区(Non-codingregion，UTR)，不仅有助于开展基因功能注释和表达谱分析，还可以大大力n