马铃薯悬浮细胞系的建立及小g蛋白atrop1,strac1的亚细胞定位-establishment of potato suspension cell line and subcellular localization of small g protein atro p1 and strac1.docxVIP

3.3讨论.......................................................184小G蛋白AtRop1，StRac1在马铃薯悬浮细胞中的定位214.1材料和方法.................................................214.1.1实验材料.................................................214.1.2实验方法.................................................214.2结果与分析.................................................224.2.1农杆菌质粒的提取.........................................224.2.2小G蛋白AtRop1在马铃薯悬浮细胞中的定位234.2.3小G蛋白StRac1在马铃薯悬浮细胞中的定位234.3讨论.......................................................245结论...........................................................26致谢..........................................................27参考文献....................................................28作者简介....................................................33缩略语表ROPRho-relatedGTPasefromplants植物小G蛋白GEFGuaninenucleotideexehangefactor鸟苷酸释放因子GAPGTPaseactivatingproteinsGTP激活蛋白GDIGuaninenucleotidedissociationinhibitor鸟苷酸解离抑制因子GFPGreenfluorescentprotein绿色荧光蛋白ABAAbscisicacid脱落酸6-BA6-Benzylaminopurine6-苄基腺嘌吟KTKinetin激动素NAAα-Naphthaleneaceticacidα-萘乙酸KanKaneimeisu卡那霉素RifRifampicin利福平霉素TTCTriphenyltetrazoliumchloride氯化三苯基四氮唑FDAFluoresceindiacetate荧光素双醋酸酯PEGpolyethyleneglycol聚乙二醇MSMurashigeandSkoog(medium)MS（培养基）1前言植物细胞悬浮培养（Cellsuspensionculture）是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里培养单细胞及小细胞团的培养系统，是植物细胞生长的微生物化。高等植物通过离体培养，使植物细胞或小块的组织生长、发育和分化、再生成完整的植株，使细胞水平上的遗传操作易于传递到植物体的细胞内，从而实现植物品种的改良。植物的根、茎、叶、下胚轴、子叶、叶柄等组织均能通过组织培养诱导出愈伤组织，愈伤组织可以在液体振荡条件下获得悬浮细胞。由于悬浮细胞的分散性好，细胞形状及细胞团的大小大致相同，而且生长迅速，重复性好，易于控制，所以被广泛用于生理学、细胞学、生物化学、遗传学、分子生物学的研究[1]。1.1悬浮细胞的培养方法色泽新鲜、生长旺盛、质地疏松且增殖率高的愈伤组织可以用来获得悬浮细胞系。这种状态下的愈伤组织生长迅速、易于分散，在悬浮培养基中细胞分裂旺盛，单细胞多，适合进行悬浮培养以获得悬浮细胞系。在无菌操作条件下，将愈伤组织破碎成小块，接种于装有液体培养基的锥形瓶中，在25±2℃散射光或黑暗的培养室中，置于旋转式摇床上轻微震荡培养。悬浮细胞一般的生长周期为1～2周左右，每5～7d需要继代一次[2]。植物悬浮细胞系生长曲线呈典型的S型。在一个生长周期中包括了延迟期、对数生长期、减慢期和静止期这几个时期。经过短暂的延迟期后，细胞进入为期一周左右的对数生长期，在这一时期细胞数量急剧增加；达到峰值之后细胞数量的变化不太明显，为减慢期；最后进入生长的静止期。在静止期由于瓶内培养液中的营养成分已在细胞代谢的过程中被大量消耗，进而导致后期细胞数量呈现缓慢下降的趋势[3]。悬浮细胞培养物的继代方法有多种，如吸取法、静止法和瓶壁法等。吸取法通过吸取培养瓶中不同层次的培养物获得生长状态不同的悬浮细胞。吸取中间培养物进行继代培养可以获得均一性好的单细胞或细胞团的悬浮细胞系，但这些细胞增殖较慢，因此