马氏珠母贝数量性状与微卫星的关联研究-correlation between quantitative traits of pinctada martensii and microsatellites.docxVIP

I I 马氏珠母贝数量性状与微卫星的关联分析 摘 要 马氏珠母贝是我国生产海水珍珠的主要贝种。近年来，由于 马氏珠母贝养 殖群体生长性状分化，育珠母贝死亡率高，珍珠质量、产量、国际竞争力下降。 因此，培育适合海区养殖的新品种是解决当前产业问题的有效途径。传统的育 种方式加分子标记辅助育种模式已成为当今育种领域的主要发展方向，若能将 微卫星标记与数量性状相关联，理论上可为功能基因与微卫星的关系研究提供 参考资料，实践上也可为提高选育效率，加快育种进程提供技术支持。 以杂交家系为材料，利用本实验室开发的 70 对引物进行家系遗传结构分析。 结果表明，70 个微卫星位点中有 30 个 SSR 标记具有多态性 。这 30 对 SSR 引物 扩增的等位基因数为 2-5，共得到 79 个等位基因，平均有效等位基因数为 2.0 个。观测杂合度为 0.000~0.9444，平均值为 0.4633，期望杂合度为 0.1955~0.7143， 平均值为 0.4946。经卡方检验，部分位点显著（p0.05）或极显著（p0.01）偏 离 hardy-weinberg 平衡，大部分位点符合 hardy-weinberg 平衡。 对所用马氏珠母贝材料的生长性状（壳长、壳高、壳宽、总重、壳重、软 体重）和用微卫星标记所产生基因型用 SPSS17.0 软件进行关联分析，结果表明 30 个微 卫星位点中 ，有 7 个微卫 星位点与 生 长性状显著 （ p0.05） 或极显著 （p0.01）相关。4PM334 位点与壳长、壳重显著相关（p0.05）；4PM22 与软体重 显著相关（p0.05）；2PM55 与壳宽有显著相关（p0.05）；2PM63 于壳高、总重、壳 重、软体重显著相关（p0.05）；4PM31 与壳长、壳宽显著相关（p0.05）；1PM43 与壳长、壳高、壳宽、壳重显著相关（p0.05）；4PM581-1 于壳高极显著相关（p0.01）, 于总重、壳重显著相关（p0.05）。 利用筛选的 SSR 序列（来自转录组数据）在 NCBI 数据库中进行 Blastx 搜 索，发现 4PM581-1 微卫星位点与已知的海胆的细胞分裂控制家族蛋白质 45(cell division control45，CDC45)编码序列匹配度较高。 CDC45 是细胞分裂控制蛋白 家族中一个重要的成员， CDC45 基因和染色体复制的其它基因（MCM 基因、GIN 基因）组成 CDC45-MCM、CDC45-GIN 分子复合物调节 DNA 的复制、CDC45 同时 也是复制叉的组成部分。在细胞分裂周期中起着重要的作用。 本研究采用 RACE 技术，克隆得到 CDC45 基因的全长，该片段全长为 2091bp, 5’非编码区（5’UTR）为 157 个 bp, 3’非编码区（3’UTR）为 34 个 bp，其中开 放阅读框为 1967bp,编码 655 个氨基酸，末端有 26 个腺嘌呤的 ploy A 尾巴。荧 光定量 PCR 分析该片段在组织中的差异表达，结果表明，其在闭壳肌中表达量 最高，其次是鳃中，在外套膜中表达最低。 II II 关键词：马氏珠母贝，生长性状，微卫星，关联分析， CDC45 基因，克隆 PAGE PAGE IV Pinctada martensii quantitative trait associated with microsatellite Correlation analysis Abstract Pinctada martensii is the main species to produce sea pearl in our country. In recent years, due to Pinctada martensii breeding population growth trait differentiation, breeding nacre mortality rate is high, the pearl quality, output and the decrease of the international competitiveness. Cultivate suitable for sea area, therefore, breeding of new varieties is the effective way to solve the problem of the current industry. Traditional breeding and marker-assisted breeding mode has become the main development direction in