氯化锂联合huc-mscs移植对阿尔茨海默 鼠的干预作用-intervention effect of lithium chloride combined with huc - mscs transplantation on alzheimers mice.docxVIP

万方数据 万方数据 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 摘 摘 要 氯化锂联合 hUC-MSCs 移植对阿尔茨海默鼠的干预 作用 研究生 孟楠 导 师 关方霞 教授 郑州大学第一附属医院 生殖中心 中国 郑州 450052 摘 要 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种与年龄直接相关的神经系统 退行性疾病，其病因及发病的分子机制目前还不完全清楚，目前的治疗方法只 能改善症状，延缓病情进展。神经干细胞的发现为 AD 的治疗提供了新的思路。 有效激活内源性神经干细胞和采用外源性干细胞移植以替代和修复受损的神经 元是治疗 AD 的两大策略。但干细胞在体内生长和体外培养的过程中都会出现衰 老现象，进而导致衰老相关疾病的发生和干细胞的应用受限。 Wnt/β-catenin 信号通路在胚胎生长发育中起着至关重要的作用。报道显示激 活 Wnt/β-catenin 信号通路可以促进干细胞向神经细胞分化，调节体内海马部位 的神经发生。研究发现间充质干细胞对阿尔茨海默鼠海马神经发生和神经分化 的促进作用可能是通过激活 Wnt/β-catenin 信号通路实现的。氯化锂（lithium chloride，LiCl）作为治疗双相性情感障碍最重要的药物，应用于临床已有 100 余年的历史，其安全性和有效性已得到有效证实。同时，LiCl 是 Wnt/β-catenin 信号通路的关键蛋白糖原合成激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β） 的直接抑制剂，可以使 β-catenin 在细胞核内聚集，从而激活 Wnt/ β-catenin 通路。 研究发现 LiCl 可以改善阿尔茨海默鼠的空间记忆能力和神经退行性病变。而 LiCl 联合干细胞对阿尔茨海默病的治疗作用目前尚未见报道。 目的 I 因此，本课题以 LiCl 为靶点，以人脐带来源的间充质干细胞（human umbilical cord derived mesenchymal stem cells，hUC-MSCs）为对象，体外观察 LiCl 对 hUC-MSCs 增殖、衰老、凋亡以及神经分化能力的影响，然后通过体内实验评价 LiCl 联合 hUC-MSCs 对 AD 鼠的神经修复和干预作用，并初步探讨其可能的分 子机制，以期提高干细胞对 AD 的治疗效果，为 AD 的治疗提供理论依据。 方法 1、体外实验研究 LiCl 对 hUC-MSCs 增殖、衰老和神经分化的影响 实验分为 2 组：对照组(MSCs 组)和 LiCl 处理组（MSCs+LiCl 组）。CCK-8 实验和 EdU 染色法检测 LiCl 对 hUC-MSCs 增殖的影响；流式细胞术检测 LiCl 对 hUC-MSCs 周期和凋亡的影响；β-半乳糖苷酶染色法检测 LiCl 对 hUC-MSCs 衰老的影响；qRT-PCR 和 Western Blot 检测 LiCl 对 hUC-MSCs 中衰老相关基因 在 mRNA 和蛋白水平表达的影响；细胞免疫荧光法检测神经诱导分化后 NSE、 DCX、β-III Tubulin 的表达情况；qRT-PCR 检测神经诱导分化后 Ngn1、Ngn2、 Mash1 的表达情况。 2、体内实验分析 LiCl 联合 hUC-MSCs 移植对 AD 鼠的干预作用 取 60 只 4 月龄 AD 模型鼠（APP695v717 转基因小鼠），分为 6 组：对照组 （APP-组），AD 模型组(APP+组)、LiCl 腹腔注射组（LiCl 组）、hUC-MSCs 移植 组（MSCs 组）、LiCl 预处理 hUC-MSCs 移植组（LiCl 预组）LiCl 联合 hUC-MSCs 移植组（LiCl+MSCs 组）。Morris 水迷宫法检测小鼠的学习记忆能力；取