慢性鼻-鼻窦炎中细菌生物膜与溶菌酶slpi和gp340关系的实验研究-experimental study on the relationship between bacterial biofilm and lysozyme slpi and gp 340 in chronic rhinosinusitis.docx

摘 摘 要 万方数据 万方数据 本研究由以下三部分组成： 第一部分：溶菌酶，SLPI 和 gp340 在细菌生物膜相关 慢性鼻-鼻窦炎中的表达 目的： 探讨溶菌酶，SLPI 和 gp340 在具有不同细菌生物膜状态的慢性鼻-鼻窦炎患 者鼻窦黏膜的表达情况。 方法： 收集 CRS 患者 63 名和对照组脑脊液鼻漏患者 20 名的筛窦黏膜样本，以激 光共聚显微镜观察鼻窦黏膜样本表面细菌生物膜情况，分别以 RT-PCR，免疫组 化和 Western blot 检测溶菌酶，SLPI 和 gp340 在鼻窦黏膜中的表达。 结果： 35/63（55.6%）的 CRS 患者细菌生物膜阳性，对照组未检出细菌生物膜。 CRS 患者溶菌酶，SLPI 和 gp340 的 mRNA 和蛋白表达水平均较对照组上调；细 菌生物膜阳性 CRS 患者溶菌酶，SLPI 和 gp340 的 mRNA 和蛋白表达水平较细 菌生物膜阴性的 CRS 患者增强。 结论： 溶菌酶，SLPI 和 gp340 在鼻窦黏膜中呈组成性表达，CRS 患者溶菌酶，SLPI 和 gp340 在 mRNA 和蛋白水平的表达上调与细菌生物膜有关，CRS 中细菌生物 膜和固有免疫应答的改变密切相关。 第二部分：金黄色葡萄球菌生物膜对人离体鼻窦黏膜溶菌酶， SLPI 和 gp340 表达的影响 目的： 探讨不同表型金黄色葡萄球菌对人离体鼻窦黏膜组织溶菌酶，SLPI 和 gp340 表达的影响。 II 方法： 采集 10 例经鼻内镜脑脊液鼻漏修补术患者的筛窦黏膜进行离体组织培养并 建立金黄色葡萄球菌游离菌和生物膜感染模型。以激光共聚显微镜确认模型建 立成功，分别在建模后 8 小时，16 小时及 24 小时以 ELISA 法测定溶菌酶，SLPI 和 gp340 分泌水平；24 小时后以 RT-PCR，免疫组化和 Western blot 法检测培养 组织中溶菌酶，SLPI 和 gp340 的 mRNA 和蛋白表达水平。结果 金黄色葡萄球 菌游离菌和生物膜刺激溶菌酶，SLPI 和 gp340 在离体鼻黏膜组织模型中表达上 调的水平不同；模型中溶菌酶，SLPI 和 gp340 的分泌水平呈现时间依赖趋势。 结论： 金黄色葡萄球菌生物膜较游离菌更能诱导溶菌酶，SLPI 和 gp340 在鼻窦黏 膜组织中高表达，是影响宿主固有免疫的重要因素。 第三部分：溶菌酶，SLPI 和 gp340 对体外金黄色葡萄球菌和 铜绿假单胞菌生物膜的作用 目的： 通过体外实验研究溶菌酶，SLPI 和 gp340 对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞 菌生物膜的作用。 方法： 体外培养金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌参考株及临床分离株，不同方法 建立细菌生物膜体外模型。分别在细菌生物膜形成的不同阶段用不同浓度的溶 菌酶，SLPI 和 gp340 进行干预；以结晶紫染色，Baclight 染色，alamarBlue 检测 和激光共聚显微镜观察分析干预效果。 结果： 溶菌酶，SLPI 和 gp340 在体外对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌游离菌和 生物膜有不同程度的杀伤作用；两种蛋白联合的抗菌与抗生物膜效应较单一蛋 白显著增强。结论 生物膜形成是细菌抵抗机体免疫反应的重要机制；溶菌酶， SLPI 和 gp340 是重要的抗菌蛋白，在固有免疫应答中互相配合发挥效应。 III 关键词：慢性鼻-鼻窦炎，细菌生物膜，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，溶 菌酶，分泌性白细胞蛋白酶抑制剂，糖蛋白 340 IV Abst Abstract Experimental Studies on Relationship between Bacterial Biofilms and Lysozyme, SLPI and gp340 in Chronic Rhinosinusitis Abstract Chronic rhinosinusitis (CRS) is a common disease in the field of otorhinolaryn- gology. This chronic inflammatory disorder of the sinonasal tract places a significant quality-of-life burden on its sufferers. Among triggers in its underlying pathogenic mechanisms, pathogenic infection is considered as an important one. The biofilm is another bacterial phenotype different from the planktonic