毛冬青甲素对大鼠脑缺血再灌注后vegf和vegfr2的表达及神经元再生的影响-effects of ilex pubescens a on expression of vegf and vegfr 2 and neuronal regeneration after cerebral ischemia-reperfusion in rats.docxVIP

PAGE PAGE 4 毛冬青甲素对大鼠脑缺血再灌注后 VEGF 和 VEGFR2 的表达及神经元再生的影响 摘 要 目的：探讨毛冬青甲素（Ilexonin，IA）对大鼠脑缺血再灌注后 VEGF 和 VEGFR2 的表达及神经元再生的影响的可能作用机制。 方法：线栓左侧大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO） 制成 SD 大鼠脑缺血模型，随机分成：正常组、假手术组、模型组、IA 治疗组（分 IA71、142、285μmol·kg- 1 三个亚组）等 4 组。采用 Longa 评分法进行大鼠神经 功能评分； TTC 染色法观察脑缺血再灌注模型组和治疗组缺血灶情况；免疫组 化检测缺血再灌注后不同时段各组缺血周边区 VEGF、VEGFR2 阳性细胞数的变 化；免疫荧光检测缺血再灌注后不同时段各组脑侧室室管膜下区(SVZ) 神经元 再生标记物 Nestin 阳性细胞数的变化；免疫印迹法检测缺血再灌注后不同时段各 组缺血周边区 VEGF、VEGFR2 及脑侧室室管膜下区(SVZ)神经元再生标记物 Nestin 蛋白的表达情况。并比较不同剂量（IA71、142、285μmol·kg- 1）的 IA 干 预对大鼠神经功能缺损评分，缺血区周边组织 VEGF、VEGFR2 及 SVZ 的 Nestin 蛋白表达和阳性细胞数的影响。 结果：脑缺血再灌注后 3d，模型大鼠神经功能缺损评分较高（P0.05 VS 14d、 28d）；VEGF、VEGFR2、Nestin 阳性细胞在正常组及假手术组散在见到，模型 组 7d 达到高峰，随时间延长其表达逐渐减少；VEGF、VEGFR2、Nestin 蛋白于 正常组及假手术组表达较少，模型组自第 3d 有一定量的表达，第 7 天表达最多， 之后逐渐减少，至 28 天仍有表达。模型组 7d 与相应模型组其它时段比较 P0.05。 经不同剂量 IA71、142、285μmol·kg- 1 干预后，大鼠神经功能缺损评分有明显下 降；缺血周边区 VEGF、VEGFR2 及 SVZNestin 蛋白表达和阳性细胞数明显增多， 与模型组相应时间点比较显著性差异（P0.05）。以 285μmol·kg- 1 作用为著。 结论：1、脑缺血再灌注损伤可诱导 VEGF、VEGFR2 的早期表达(至少 14d)， VEGF、VEGFR2 的早期应激表达可能与及时挽救缺血周边组织神经元的存活和 再生进而促进神经功能恢复有关。2、毛冬青甲素可以促进缺血周边组织 VEGF、 VEGFR2 表达(至少 14d)，其机制可 能 通过上调 VEGF、VEGFR2 表达促进神经 元的存活和再生进而发挥其神经保护作用。 关键词： 毛冬青甲素 脑缺血再灌注 血管内皮生长因子 血管内皮生长 因子受体 2 神经元再生 The impact of Ilexonin A on expression of VEGF, VEGFR2 and Neurogenesis after Cerebral Ischemia-Reperfusion in Rats ABSTRACT OBJECTIVE To explore the effect of IlexoninA on expression of VEGF, VEGFR2 and neurogenesis and its possible mechanism after cerebral ischemia- reperfusion in Rats. METHODS The model of Middle cerebral artery occlusion(MCAO) was established to transient focal ischemia by placement of an intraluminal filament at the origin of left middle cerebral artery. The rats were divided randomly into: control, sham operation, model and IlexoninA (IA71、142、285μmol·kg- 1) treatment groups. Neuronogical behavior was evaluated by Longa’s scoring method. TTC staining was applied to observe cerebral ischemia in MCAO model group and IlexoninA treatment groups. Immunohistochemistry were use