马来酸桂哌齐特对脑缺血大鼠模型神经保护作用分析-neuroprotective effect of cinepazide maleate on cerebral ischemia rats.docxVIP

上海交通大学医学院硕士学位论文 上海交通大学医学院硕士学位论文 万方数据 万方数据 马来酸桂哌齐特对脑缺血大鼠模型神经保护作用研究 摘 要 背景：脑血管病是常见的神经系统危重疾病，其中脑梗死占脑血管病的 56.6%～ 80%，致残率为第一位，给社会和家庭带来沉重负担。脑缺血梗死后，会促发一系 列的缺血级联反应，这一病理损伤过程涉及一系列蛋白的激活和基因调控的变化， 造成神经元的损害往往是不可逆的。目前对缺血性脑卒中的研究多集中缺血后抑 制缺血损伤反应，较少涉及内源性神经保护的作用。腺苷(Adenosine ) 是组织细 胞产生并释放的 ATP 内源性代谢产物，能通过特异性受体介导发挥自稳态调节作 用及神经调质作用而保护缺血后脑组织。但外源性腺苷半衰期太短及大剂量可导 致心律失常等严重副作用，限制了它在临床上的使用。马来酸桂哌齐特（cinepazide maleate，CM），通过阻滞细胞对腺苷重吸收及抑制腺苷脱氨酶活性，具有独特的 内源性腺苷 增效作用 。我们通过 预先给 予 CM 并建立永久 大 脑中动脉阻塞 （permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO）模型，观察 CM 预处理对 脑缺血的保护作用，探讨可能的机制。本课题分为两部分： 第一部分：腺苷增效剂（马来酸桂哌齐特）对局灶性脑缺血大鼠模型保护效应 目的：初步探讨腺苷增效剂（CM）对 pMCAO 模型大鼠神经保护作用。 方法：首先通过给予 SD 大鼠不同剂量的 CM 或生理盐水，然后用线栓法 建立 pMCAO 模型大鼠，观察其对大鼠行为学的影响，为下一步实验提供经济、 有效可行的使用剂量；将 SD 大鼠随机分为缺血对照组、马来酸桂哌齐特预处 理组，根据剂量摸索的结果预先给予 CM 预处理，制作 pMCAO 模型大鼠后， 比较缺血对照组和马来酸桂哌齐特预处理组缺血损伤后梗死体积并应用磁共 振波谱技术测定两组缺血损伤后不同时间（3h、6h 和 24h）及不同部位（梗死 核心区、梗死周围区及其对侧脑区相应部位）的代谢物：氮-乙酰天门冬氨酸 （NAA）、肌酸（Cr）和胆碱化合物（Cho）的浓度变化；比较不同部位的代 谢物相对浓度（rNAA、rCr 和 rCho）的差异。 结果：CM 预处理能够改善 pMCAO 模型大鼠的神经功能并减少梗死体积； MRS 显示，缺血梗死早期梗死核心区与周围区以 NAA 下降为主，核心区 rNAA 随时间变化进行性下降，CM 能减少 NAA 的降低。 V 结论：CM 具有保护神经元，提高抗缺血缺氧的能力；NAA 作为神经元 的标志物，可成为评判药物对脑细胞保护或治疗效果的一个敏感性指标。 第二部分：马来酸桂哌齐特对局灶性脑缺血大鼠模型缺血半暗带 MAPK 信号转导 通路的影响 目的：观察 CM 预处理对大鼠脑缺血半暗带 ERK1/2 和 p38 MAPK 磷酸 化表达的影响，探讨其对脑缺血保护的可能作用机制。 方法：SD 大鼠随机分为缺血对照组、CM 预处理组和假手术组。用线栓 法建立 pMCAO 模型大鼠；应用特异性抗体，通过免疫组化和 western 印迹法 检测三组大鼠急性脑缺血后半暗带区不同时间点 ERK 和 P38 磷酸化表达的变 化。 结果：CM 预处理能上调缺血半暗带区 ERK 磷酸化的表达，抑制 p38 磷 酸化的表达。 结论：可能激活 MAPK 信号通路是马来酸桂哌齐特保护缺血性脑损伤的 机制之一。 关键词：脑缺血；磁共振波谱；MAPK；腺苷；马来酸桂哌齐特 VI NEUROPROTECTION OF CINEPAZIDE MALEATE IN THE PERMANENT MIDDLE CELEBRAL ARTERY OCCLUSION RAT MODEL ABSTRACT Background: Cerebrovascular disease is a common neurological illness, including about 56.6%～80% cerebral infarction of cerebrovascular disease, and result in high morbidity, which will be a heavy burden on society and family.After cerebral ischemia infarction, ischemic cascade will trigger a series of reactions that damage the pathological process involves a series of changes in the activ