绿原酸对体外培养成骨细胞活性影响的初步分析-effect of chlorogenic acid on osteoblast activity in vitro.docxVIP

中南民族大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权中南民族大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密□，在_年解密后适用本授权书。2、不保密√□。（请在以上相应方框内打“√”）作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日III英文缩写检索CGA绿原酸MC3T3-E1小鼠成骨细胞系MTT噻唑蓝DMSO二甲基亚砜ALP（Alkalinephosphatase）：碱性磷酸酶Col-I（CollagenI）：I型胶原蛋白OCN（Osteocalcin）：骨钙蛋白OPN（Osteopontin）：骨桥蛋白BMP（Bonemorphogeneticprotein）：骨形态发生蛋白BSP（Bonesialoprotein）：骨涎蛋白GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）：三磷酸甘油醛脱氢酶I摘要接骨草属于忍冬科接骨木属，接骨草的根、茎、叶、花及果实均可入药。在传统中医药中，它可治疗风湿疼痛、跌打损伤和骨折。目前关于接骨草防治骨质疏松和促进成骨的报道较多，但其促进成骨及骨折愈合的有效成分尚不清楚。本研究以接骨草的主要化学成分之一——绿原酸(chlorogenicacid,CGA)为研究对象，研究其对体外培养的成骨细胞活性的影响，以期阐明其是否具有成骨活性，为接骨草的临床应用提供理论依据。本研究以成骨细胞系MC3T3-E1为模型，用MTT法检测CGA对成骨细胞增殖的影响、用碱性磷酸酶试剂盒检测CGA对成骨细胞ALP活性的影响，并用实时荧光定量PCR技术检测CGA对成骨细胞成骨相关基因表达的影响。MTT实验结果表明，11.02~88.19μmol/L的CGA对成骨细胞的增殖均具有明显的促进作用，因此，本研究以22.05和44.09μmol/L两个浓度的CGA进行进一步研究。CGA对成骨细胞ALP活性的影响的结果表明，CGA长期处理(6天)具有抑制成骨细胞ALP活性的作用。实时荧光定量PCR结果显示，在整个培养过程中，CGA可以促进Col-1、OCN、BMP-2基因的表达。CGA短期处理细胞(2天)可以促进Jun-D、c-Jun、c-fos，Fra-1，Fra-2，ALP，Runx2，Osterix等基因的表达；CGA长期处理细胞(6天)可以促进BSP，OPN基因的表达。综上所述，CGA具有调控成骨细胞增殖和分化的能力，对成骨细胞前体的分化具有一定的抑制作用，即CGA处理不利于干细胞向成骨细胞的分化。但是，它通过促进骨基质的形成和骨成熟分化而促进新骨成熟。因此，CGA具有一定的成骨活性，是接骨草的成骨有效成分之一。关键词：绿原酸；成骨细胞；细胞增殖；碱性磷酸酶；成骨分化相关基因IIAbstractSambucuschinensisLindlbelongstocaprifoliaceaeandsambucus.Itsroot,stemandleafcanbeusedasamedicine.IntraditionalChinesemedicine,itisoftenusedtotreatrheumatism,traumaticinjuryandfracture.Atpresent，therearemanyreportsofSambucuschinensisLindlaboutpreventingosteoporosisandpromotingproliferationofosteoblasts,however,theeffectivecomponentforpromotingfracturehealingisnotclear.Theaimofthisstudyistoinvestigatetheinfluenceofchlorogenicacid——onemainingredientofSambucuschinensisLindlonosteoblastsculturedinvitro,inordertoidentifywhetherSambucuschinensisLindlhastheeffectofpromotingosteogenesisandprovidethe