脐血内皮祖细胞糖基化修饰及其在缺血性动物模型应用-glycosylation modification of umbilical cord blood endothelial progenitor cells and its application in ischemic animal models.docxVIP

脐血内皮祖细胞糖基化修饰及其在缺血性动物模型的应用中文摘要5.所培养细胞具有EPCs的特征，具有摄取DiI标记的Ac-LDL的能力和体外成血管能力。6.将FucTVI质粒转染至EPCs中，48小时后通过Westernblot检测到FucTVI蛋白在EPCs中表达。7.使用特异性识别人sLex结构的抗体HECA-452，通过流式细胞术比较转染FucTVI表达质粒及转染空载体质粒的EPCs表面sLex的表达差异，结果FucTVI质粒转染组sLex的阳性表达率约89.93%??2.13，空载体质粒转染组sLex的阳性表达率约5.29%??1.25，两组比较p0.01。8.通过流式细胞术比较FucTVI质粒转染组与空载体质粒转染组与P-选择素和E-选择素的结合能力差异，结果FucTVI质粒转染组与P-选择素结合率为87.61%?2.37，与E-选择素结合率为83.44%??3.11；空载体质粒转染组与P-选择素结合率为8.56%??1.17，与E-选择素结合率为3.11%??0.89。由此可见，FucTVI质粒转染组与P-选择素和E-选择素的结合能力较空载体质粒转染组明显增强。9.FucTVI质粒转染组EPCs与TNF-α刺激后的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的粘附能力是空载体质粒转染组粘附能力的1.3倍。10.建立联合免疫缺陷小鼠下肢缺血模型，将体外标记的FucTVI质粒转染组及空载体质粒转染组的EPCs通过尾静脉注射入小鼠体内，三天后收集下肢缺血侧肌肉，结果在荧光显微镜下观察到缺血部位EPCs的粘附，且在缺血部位EPCs的粘附FucTVI质粒转染组为空载体质粒转染组的转染组的2.44倍，p0.01。11.在缺血后14天通过激光多普勒超声检测三组小鼠下肢血流情况，结果显示糖基化处理组缺血侧/对照侧的血流灌注比值较未糖基化处理组升高34%，未糖基化处理组较生理盐水组升高42%，糖基化处理组较生理盐水组升高90%，三组之间的差异均有统计学意义。缺血侧下肢肌肉组织HE染色显示糖基化处理组微脉管结构再生强于未糖基化处理组，未糖基化处理组强于生理盐水组。免疫荧光检测缺血侧下肢肌肉毛细血管密度，结果糖基化处理组毛细血管密度为未糖基化处理组1.57倍，未糖基化处理组毛细血管密度为生理盐水组1.75倍，三组之间的差异均有统计学意义（p0.01）。中文摘要脐血内皮祖细胞糖基化修饰及其在缺血性动物模型的应用结论：首先我们从脐血中分离和培养出了EPCs，研究发现脐血来源的EPCs存在PSGL-1糖基化缺陷，通过体外糖基化修饰恢复了EPCs的PSGL-1功能后，经体外实验和体内动物模型证实了糖基化修饰后EPCs的治疗效果。此研究发现为促进EPCs归巢至血管形成部位从而增强干细胞的治疗效果提供了一种新的有效的治疗策略。关键词：脐血内皮前体细胞；糖基化；下肢缺血动物模型作者：刘珍珍指导老师：董宁征脐血内皮祖细胞糖基化修饰及其在缺血性动物模型的应用英文摘要SurfaceFucosylationofHumanCordBlood-DerivedEndothelialProgenitorCellsandItsApplicationinExperimentalIschemicAnimalModelsAbstractObjective:Peripheralvasculardiseaseisamajorhealthproblemintheworld.Inthelatestagesofthisdisease,progressionoftissuehypoperfusionresultsinischemiculcerationandgangrene,leadingtoamputationinmorethanathirdofpatients.Since1997,postnatalvasculogenesishasbeenpurportedtobeanimportantmechanismforangiogenesisviacirculatingendothelialprogenitorcells(EPCs).Basedonthisparadigm,EPCshavebeenextensivelystudiedasacell-basedtherapyforrepairofdamagedbloodvessels.P-selectin,E-selectin,andP-selectinglycoproteinligand-1(PSGL-1)cooperativelymediateEPCsrolling,thefirststepinEPCshometothelesion.Recentexperimentssuggestthatapproximately25%ofcordbloodCD34+he